2.6.8 Пирогенность

Испытание состоит в измерении роста температуры тела вызванного у кро­ликов внутривенным введением стерильного раствора испытуемой субстанции.

Выбор животных. Используют здоровых взрослых кроликов обоего пола мас­сой не менее 1,5 кг, # желательно от 2,0 до 3,5 кг # получавших полноценное сба­лансированное питание, не включающее антибиотиков, масса тела которых не снижалась в течение недели, предшествующей испытанию. Кролика не следует использовать в испытании на пирогенность, если:

а) он использовался в испытании на пирогенность, давшем отрицательный ре- зультат, в течение предшествующих 3 дней:

б) он использовался в испытании на пирогенность, в котором испытуемая суб- станция была признана не соответствующей требованиям, в течение предшест- вующих 3 недель.

# Кролики, бывшие в опыте, могут быть использованы для определения пи-рогенности повторно, но не ранее чем через 3 суток, если внедренный им до этого раствор лекарственного средства или вода для инъекций были непирогенными. Если же введенный раствор лекарственного средства или вода для инъекций ока­зались пирогенными, кролики могут быть использованы для дальнейших опытов через 2 недели. При повышении температуры у кроликов в подобных случаях на 1,2^оС и более они используются через 3 недели. Если исследуемые вещества об­ладают антигенными свойствами, то одних и тех же кроликов нельзя использовать для испытания повторно (если нет специальных указаний в частной статье)

Помещение для животных. Кроликов содержат индивидуально в спокойном помещении при однородной подходящей температуре. Кроликов не кормят в те­чение ночи и до окончания испытания. В течение испытания кроликам не дают во­ду. Испытание проводят в тихом помещении, где отсутствует риск возникновения помех, которые могут возбудить животных, и в котором температура поддержива­ется на уровне, не более, чем на 3⁰С отличающемся от температуры, поддержи­ваемой в месте постоянного содержания кроликов, или в котором кролики содер­жались в течение не менее 18 часов до начала испытания.

Материалы. Стеклянная посуда, шприцы и иглы. Тщательно моют всю стеклянную посуду, шприцы и иглы водой для инъекций и нагревают в сухожаро-вом шкафу при 250⁰С в течение 30 минут или при 200⁰С в течение 1 часа.

Клетки. Клетки для кроликов, температура которых измеряется с помощью электрического прибора, устроены таким образом, чтобы животные фиксирова­лись лишь с помощью свободно закрепленных на шее хомутов; остальная часть тела остается относительно свободной так, чтобы кролики могли сидеть в обыч­ном положении. Они не удерживаются с помощью ремней или другими подобны­ми методами, которые могут причинить вред животному. Животные помещаются в клетки не менее чем за 1 час до первого измерения температуры и остаются там в течение испытания.

Термометры. Используют термометр или электрическое устройство, пока­зывающее температуру с точностью до 0,1⁰С, вводя его в прямую кишку кролика на глубину около 5-7 см. Глубина введения постоянна для каждого из кроликов в течение каждого из испытаний. При использовании электрического устройства, оно может оставаться на месте в течение всего испытания.

Предварительное испытание. После отбора животных, за 1-3 дня до про­ведения испытания продукции, тем из них, которые не использовались в течение последних двух недель, вводят внутривенно апирогенный раствор хлорида натрия концентрацией 9 г/л, нагретый приблизительно до 37,0⁰С в количестве 10 мл на килограмм массы тела. Записывают температуру животных, начиная не менее, чем за 90 минут до введения и продолжая в течение 3 часов после введения рас­твора. Животные, температура которых колеблется в пределах более 0,6⁰С, не используются в основном испытании.

Основное испытание. Испытание проводят с использованием группы из трех кроликов.

Подготовка и введение продукта. Испытуемую жидкость перед введением нагревают до 37,0⁰С. Испытуемый продукт может быть растворен или разведен в апирогенном растворе, содержащем 9 г/л хлорида натрия, или другой раствори­телем, указанной в частной статье. Раствор медленно вводят в крайнюю вену уха каждого из кроликов в течение не более 2 минут, если иное не предписано в част­ной статье. Количество вводимого продукта варьируется в зависимости от испы­туемого препарата и указывается в частной статье. Вводимый объем должен со­ставлять не менее 0,5 мл и не более 10 мл на 1 кг массы тела.

# Объем введенного раствора должен составлять не менее 0,1 мл и не бо­лее 10 мл на 1,0 кг массы тела кролика.

Определение исходной и максимальной температуры. За «исходную тем­пературу» каждого из кроликов принимают среднее из двух значение температу­ры, записанных для данного кролика с интервалом 30 минут в течение 40 минут, предшествующих введению испытуемого продукта. «Максимальная температура» каждого из кроликов - самая высокая температура, записанная для данного кро­лика в течение 3 часов после введения. Температуру каждого из кроликов запи­сывают с интервалами, не превышающими 30-60 минут, начиная не менее, чем за 90 минут до введения испытуемого продукта и продолжая в течение 3 часов после введения. За результат испытания принимают разность между максимальной и исходной температурами каждого из кроликов. При отрицательной разности ре­зультат принимают равным нулю.

При определении исходной температуры кролики, у которых два последо­вательных значения температура варьируется в пределах, превышающих 0,2⁰С, изымаются из испытания. В каждом из испытаний используют кроликов, исходная температура которых отличается друг от друга не более, чем на 1⁰С. Кролики, ис­ходная температура которых выше 39,5⁰С или ниже 38,5⁰С, изымаются из испыта­ния.

Интерпретация результатов. После проведения испытания на группе из трех кроликов, его при необходимости повторяют на других группах из трех кроли­ков (суммарно до четырех групп), в зависимости от полученных результатов. Если суммированный результат, полученный в первой группе, не превышает значение, данное во второй колонке таблицы 2.6.8.-1, считают, что субстанция выдерживает испытание. Если суммированный результат превышает значение, данное во вто­рой колонке таблицы, но не превышает значение, данное в третьей колонке таб­лицы, испытание повторяют, как указано выше. Если суммированный результат превышает значение, данное в третьей колонке таблицы, считают, что продукт не выдерживает испытание.

Таблица 2.6.8.-1.

Количество кроликов

Продукт выдерживает испыта- Продукт не выдерживает ние при суммированном ре- испытание при суммиро-зультате, не превышающем: ванном результате, пре­вышающем:

~3~~

6

9

12

1,15°С 2,80°С 4,45°С 6,60°С 2,65°С 4,30°С

5,95⁰С

6,6°°С

# Интерпретация результатов

Воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают непиро-генным, если сумма повышений температуры у 3 кроликов меньше или равна 1,4^оС; если эта сумма превышает 2,2^оС, то воду для инъекций или раствор лекар­ственного средства считают пирогенными. В случаях, когда сумма повышений температуры у 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2^оС, испытание по­вторяют дополнительно на 5 кроликах. В этом случае воду и для инъекций или раствор лекарственного средства считают непирогенным, если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7^оС. Если же эта сумма равна 3,8^оС или больше, воду для инъекций или раствор лекарственного средства счи­тают пирогенным.

# Таблица 2.6.9

Количество Продукт выдерживает испыта- Продукт не выдерживает испы- кроликов ние при суммированном резуль- тание при суммированном ре-

тате, не превышающем: зультате, превышающем:

~3 1,4°С 2,2°С

5 1,5 до 2,2^оС 3,7°С

#Примечание: Испытание проводят поэтапно. На I этапе его выполняют на трех кроликах. Если необходим II этап, его выполняют на пяти кроликах.