2.2.26. Бумажная хроматография

• Хроматография на бумаге представляет собой хроматографический метод разделения, при котором подвижная жидкая фаза перемещается по капиллярам и поверхности фильтровальной бумаги, либо веществ, предварительно нанесенных на ее волокна. В бумажной хроматографии используют хроматографическую бумагу нужной плотности квалификации «Для хроматографии».

ВОСХОДЯЩАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА БУМАГЕ

Оборудование. Представляет собой стеклянную камеру с тщательно пришлифованной крышкой, соответствующую по размерам используемой хроматографической бумаге. Камера в верхней части должна быть снабжена приспособлением для закрепления хроматографической бумаги, с помощью которого ее можно опускать не открывая камеры. На дне камеры помещена емкость (лодочка) для подвижной фазы, в которую должен быть погружен нижний край бумаги. Хроматографическая бумага представляет собой соответствующую фильтровальную бумагу, разрезанную на полоски достаточной длины и шириной не менее 2,5 см; бумага должна быть разрезана так, чтобы подвижная фаза двигалась вдоль направления волокна бумаги.

• В некоторых случаях допускается использование хроматографических камер других типов с описанием их в частной статье.

Методика. Обозначенную в частной статье подвижную фазу помещают в лодочку в количестве, достаточном для образования слоя не более 2.5 см. Как указано в частной статье, между стенками камеры и лодочки помещают хроматографическую бумагу. Для насыщения камеру закрывают крышкой и выдерживают обычно 24 часа при температуре от 20^оС до 25^оС. Поддерживают такую температуру камеры на протяжении всего испытания.

На расстоянии 3 см от одного края по всей ширине полоски бумаги карандашом наносят тонкую горизонтальную линию. Обозначенный в частной статье объем раствора наносят на полученную линию при помощи микропипетки. Если весь обозначенный раствор образует пятно диаметром более 10 мм, раствор наносят небольшими порциями, давая каждому из них высухнуть перед нанесением следующего. Если на одной полоске бумаги должно быть получено больше одной хроматограммы, растворы наносят вдоль линии так, чтобы расстояние между точками нанесения частных проб было не менее 3 см.

• Если условия насыщения хроматографической камеры, нанесения пятен или хроматографирования отличаются от условий, описанных выше, они должны быть описаны в частной статье.

Бумагу помещают в камеру, закрывают камеру крышкой и выдерживают 1.5 часа. Бумагу опускают в подвижную фазу и проводят элюирование в соответствии с указанным временем или на указанное растояние, которое должна пройти подвижная фаза. На протяжении всего процесса элюирования бумагу защищают от воздействия прямых солнечных лучей. Полоску бумаги вынимают из камеры и сушат на воздухе.

• После прохождения подвижной фазы необходимого расстояния, обозначенного в частной статье, бумагу вынимают, отмечают карандашом конец положения фронта подвижной фазы, сушат и проявляют пятна обозначенным в частной статье способом.

• Визуальную оценку, количественное определение, проверку пригодности хроматографической системы, способы оценки определения примесей, контроль специфических примесей, контроль общего содержания примесей проводят в соответствии со статьей 2.2.27 «Тонкослойная хроматография».

НИСХОДЯЩАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА БУМАГЕ

Оборудование. Представляет собой стеклянную камеру с тщательно пришлифованной крышкой, соответствующую по размерам используемой хроматографической бумаге. В центре крышки должно быть отверстие с диаметром около 1,5 см, закрытое тяжелой стеклянной пластиной или пробкой. В верхней части камеры располагается лодочка для подвижной фазы, снабженная приспособлением для закрепления хроматографической бумаги. От каждой стороны лодочки параллельно ей и немного выше верхнего ее края размещены два прямых стеклянных стержня, которые поддерживают бумагу в таком положении, чтобы она не соприкасалась со стенками камеры. Хроматографическая бумага представляет собой соответствующую фильтровальную бумагу, разрезанную на полоски достаточной длины и шириной не менее 2,5 см и не более длины кюветы; бумага должна быть разрезана таким образом, чтобы подвижная фаза двигалась вдоль направления волокна бумаги.

• В необходимых случаях допускается использование хроматографических камер других типов с описанием их в частной статье.

Методика. Обозначенную в частной статье подвижную фазу помещают в лодочку в количестве, достаточном для образования слоя не более 2,5 см. Для насыщения камеру закрывают крышкой и выдерживают обычно 24 часа при температуре от 20^оС до 25^оС. Поддерживают такую температуру камеры на протяжении всего испытания.

По всей ширине полоски бумаги карандашом наносят тонкую горизонтальную линию от закрепленного в лодочке края на таком растоянии, чтобы линия была размещена параллельно стеклянным стержням и несколькими сантиметрами ниже их. Обозначенный в частной статье объем раствора наносят на полученную линию при помощи микропипетки. Если весь обозначенный раствор образует пятно диаметром более 10 мм, раствор наносят небольшими порциями, давая каждому из них высохнуть перед нанесением следующего. Если на одной полоске бумаги должно быть получено больше одной хроматограммы, растворы наносят вдоль линии так, чтобы расстояние между точками нанесения частных проб было не менее 3 см.

• Если условия насыщения хроматографической камеры, нанесения пятен или хроматографирования отличаются от условий, описанных выше, они должны быть описаны в частной статье.

Бумагу помещают в камеру, закрывают камеру крышкой и выдерживают 1,5 часа. Через отверстие в крышке в кювету помещают достаточное количество подвижной фазы и проводят элюирование в соответствии с указанным временем или на указанное растояние, которое должна пройти подвижная фаза. На протяжении всего процесса элюирования бумагу защищают от воздействия прямых солнечных лучей.

• После прохождения подвижной фазой необходимого расстояния, обозначенного в частной статье, бумагу вынимают, отмечают карандашом конец положения фронта подвижной фазы, сушат и проявляют пятна обозначенным в частной статье способом.

• Визуальную оценку, количественное определение, проверку пригодности хроматографической системы, способы оценки определения примесей, контроль специфических примесей, контроль общего содержания примесей проводят в соответствии со статьей 2.2.27 «(Тонкослойная хроматография».