2.4.15. Никель в полиолах

Определение никеля проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии (2.2.23, метод 2).

Испытуемый раствор. 20,0 г испытуемого образца растворяют в смеси равных объемов кислоты уксусной разведенной Р и воды Р, доводят объем раствора этой же смесью растворителей до 100 мл и перемешивают. Прибавляют 2,0 мл насыщенного раствора (около 10 г/л) аммония пирролидиндитиокарбамата Р и 10,0 мл метилизобутилкетона Р и встряхивают в течение 30 с в защищенном от яркого света месте. Оставляют до расслоения. Для испытания используют слой метилизобутилкетона.

Растворы сравнения. Готовят три раствора сравнения аналогично испытуемому раствору, но с добавлением к 20,0 г испытуемого вещества соответственно 0,5 мл, 1,0 мл и 1,5 мл эталонного раствора никеля (10 ppm Ni) P.

Устанавливают нулевую точку на приборе, используя метилизобутилкетон Р, обработанный аналогично испытуемому раствору, но без добавления испытуемого вещества. Измеряют поглощение при длине волны 232,0 нм, используя в качестве источника излучения лампу с полым никелевым катодом и воздушно-ацетиленовое пламя.

Испытуемый образец должно содержать не более 1 ppm никеля, если нет других указаний в частной статье.

2.4.1.6. Общая зола

Фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель нагревают при красном калении (около 500^оС) в течение 30 мин, охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Если нет других указаний в частной статье, 1,00 г испытуемого вещества или измельченного в порошок лекарственного растительного сырья помещают в тигель и равномерно распределяют по дну тигля. Высушивают при температуре от 100°С до 105°С в течение 1 ч и затем сжигают до постоянной массы в муфельной печи при температуре (600+25)^оС, охлаждая тигель в эксикаторе после каждого сжигания. В продолжение всей процедуры в тигле не должно появляться пламя. Если после длительного сжигания зола всё ещё содержит тёмные частицы, содержимое тигля количественно переносят горячей водой на беззольный фильтр и сжигают остаток на фильтре вместе с фильтровальной бумагой. Фильтрат объединяют с золой, осторожно выпаривают до сухого остатка и сжигают до постоянной массы.

17. АЛЮМИНИЙ

Раствор испытуемого образца, приготовленный, как указано в частной статье, помещают в делительную воронку, встряхивают с двумя порциями, по 20 мл каждая, раствора 5 г/л гидроксихинолина Р в хлороформе Р, затем с 10мл этого же раствора. Хлороформные слои отделяют и собирают в мерную колбу вместимостью 50,0 мл. Доводят объем раствора хлороформом Р до метки и перемешивают (испытуемый раствор).

Эталон готовят аналогично, используя указанный в частной статье раствор сравнения.

Контрольный раствор готовят аналогично, используя указанный в частной статье раствор.

Измеряют интенсивность флуоресценции (2.2.21) испытуемого раствора эталона (I₂) и холостого раствора (I₃), используя возбуждающее излучение при длине волны 392 нм и вторичный фильтр с полосой пропускания, имеющей максимум при длине волны 518 нм, или монохроматор, установленный на пропускание этой длины волны.

Флуоресценция (I₁-I₃) испытуемого раствора не должна превышать флуоресценцию эталона (I₂-I₃).

18. СВОБОДНЫЙ ФОРМАЛЬДЕГИД

Метод А применяют, если нет других указаний в частной статье. Метод В применяют для вакцин, в которых для нейтрализации избыточного формальдегида используют натрия метабисульфит.

МЕТОД А

Вакцины, используемые в медицине, разводят в 10 раз.

1 мл испытуемой вакцины, разведенной, как указано выше, помещают в пробирку и прибавляют 4 мл воды Р и 5 мл реактива ацетилацетона Р1. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 40°С на 40 мин.

Параллельно в этих же условиях готовят эталон, используя вместо разведенной вакцины 1 мл раствора формальдегида Р, разведенного до содержания формальдегида (СН₂О) 20 мкг/мл.

Пробирки просматривают вдоль их вертикальных осей. Окраска испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски эталона. МЕТОД В

В пробирку помещают 0,5 мл испытуемой вакцины, разведенной в соотношении 1 к 100, прибавляют 5 мл раствора 0,5 г/л метилбензотиазолонгидразона гидрохлорида Р и 0,05 мл полисорбата 80

Р, пробирку закрывают, встряхивают и оставляют на 60 мин. Затем прибавляют 1 мл реактива железа (III) хлорида и сульфаминовой кислоты Р и оставляют на 15 мин.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят эталон, используя вместо 0,5 мл разведенной испытуемой вакцины 0,5 мл раствора формальдегида Р, разведенного до содержания формальдегида (СН₂О) 5 мкг/мл.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученных растворов на спектрофотометре при длине волны 628 нм, используя в качестве компенсационного раствора контрольный раствор.

Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать оптическую плотность эталона.

Если испытуемая вакцина представляет собой эмульсию, водную фазу отделяют следующим способом. К вакцине прибавляют равный объем изопропилмиристата Р и перемешивают. К трем объемам полученной смеси прибавляют два объема 1 М раствора кислоты хлористоводородной, три объема хлороформа Р и четыре объема раствора 9 г/л натрия хлорида Р. Тщательно перемешивают и центрифугируют с ускорением 15000 g в течение 60 мин. Водный слой отбирают и измеряют его объем. Водный слой используют для испытания на формальдегид, как указано выше.

Вычисляют концентрацию формальдегида в эталоне с учетом разведения вакцины в процессе разделения слоев и готовят эталон с соответствующей концентрацией.

Если описанная процедура не позволяет достичь разделения слоев, прибавляют раствор 100 г/л полисорбата 20 Р в растворе 9 г/л натрия хлорида Р и повторяют процедуру, центрифугируя с ускорением 22500 g.

19. ЩЕЛОЧНЫЕ ПРИМЕСИ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ

В пробирку помещают 10 мл свежеперегнанного ацетона Р и 0,3 мл воды Р, прибавляют 0,05 мл раствора 0,4 г/л бромфенолового синего Р в спирте Р; при необходимости раствор нейтрализуют 0,01 М раствором кислоты хлористоводородной или 0,01 М раствором натрия гидроксида, затем прибавляют 10 мл испытуемого масла, встряхивают и оставляют до разделения слоев.

Для изменения окраски верхнего слоя в желтую должно быть израсходовано не более 0,1 мл 0,01 М раствора кислоты хлористоводородной.

20. АНТИОКСИДАНТЫ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ

Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии (2.2.27), используя пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля G Р. Перед применением пластинки высушивают при температуре 130°С в течение 2 ч.

Испытуемый раствор (а). 20 г испытуемого образца, взятого из среднего слоя масла помещают в делительную воронку, прибавляют 50 мл петролейного эфира Р и энергично встряхивают с двумя порциями по 30 мл метанола (75 % об/об). После четкого разделения слоев нижние, метанольные, слои объединяют и выпаривают при пониженном давлении и возможно более низкой температуре в атмосфере азота. Остаток растворяют в 5 мл хлороформа, свободного от этанола Р. Хранят в плотно укупоренном сосуде.

Испытуемый раствор (Ь). Слой петролейного эфира (верхний слой), полученный при приготовлении испытуемого раствора (а), осторожно выпаривают до сухого остатка. Прибавляют 0,5 г пирогаллола Р, растворенного

в 100 мл этанола Р, затем 15 мл свежеприготовленного раствора 330 г/л натрия гидроксида Р и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Охлаждают, прибавляют 250 мл воды Р и извлекают неомыляемые вещества тремя порциями по 100 мл петролейного эфира Р. Объединенные извлечения петролейного эфира промывают водой Р до отсутствия щелочной реакции и выпаривают до сухого остатка. Остаток растворяют в 5 мл хлороформа, свободного от этанола Р. Хранят в хорошо укупоренном сосуде.

А. НЕПОЛИГИДРОКСИАНТИОКСИДАНТЫ

Пластинку помещают в хроматографическую камеру с хлороформом, свободным от этанола, Р. Когда фронт растворителя пройдет около 12 см от нижнего края пластинки, пластинку вынимают из камеры, высушивают в течение 20 мин на воздухе, затем в течение 20 мин в эксикаторе под вакуумом.

На линию старта хроматографической пластинки, подготовленной, как указано выше, в стартовую точку №1 (см. Рис. 2.4.20.-1) наносят испытуемый раствор (а) в виде пятна диаметром не более 5 мм. Объем наносимого испытуемого раствора (а) зависит от его концентрации и составляет обычно от 2 мкл до 10 мкл. В стартовые точки №№2 и 3 (см. Рис. 2.4.20.-1) наносят по 2 мкл окрашенного раствора, содержащего по 0.1 г/л диметилового желтого Р, судана красного GР и индофенолового синего Р в бензоле Р. На пластинке отмечают длину пробега (10 см) в двух направлениях. В первый раз пластинку хроматографируют в камере с хлороформом, свободным от этанола Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 10 мин, затем поворачивают на 90° и хроматографируют в камере с бензолом Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 5 мин и опрыскивают раствором 200 г/л кислоты фосфорномолибденовой Р в этаноле Р до устойчивого окрашивания пластинки в желтый цвет. Через 2 мин начинают проявляться синие пятна. В течение первых 5-10 мин пластинку обрабатывают парами аммиака до тех пор, пока фон не станет чисто белым. На пластинке остаются синие, светло-фиолетовые или зеленоватые пятна.

а — стартовая точка №1+пятно галлатов+пятно

нордигидрогваяретовой кислоты b — стартовая точка №2 с — стартовая точка №3

1. — гваяковая смола

2. — 3-(1,1 - Диметилэтил)-4-метоксифенол

3. — 2-(1,1 - Диметилэтил)-4-метоксифенол

4. — 2.2.5,7,8 - Пентаметил-6-хроманол

5. — тетраэтилтиурам дисульфид

6. — а-Токоферол

7. — дибутилгидроксианизол

8. — бутилгидроксианизол А — жёлтый

В — красный С — синий

Хроматограмму оценивают, сравнивая с Рис. 2.4.20.-1. Если на линии старта обнаруживаются синие пятна, проводят разделение и идентификацию полигидроксиантиоксидантов (метод В). В. ПОЛИГИДРОКСИАНТИОКСИДАНТЫ

На линию старта хроматографической пластинки наносят 1 мкл, 2 мкл, 4 мкл и 6 мкл испытуемого раствора (а), а также от 1 мкл до 2 мкл окрашенного раствора, приготовленного, как указанно в методе А. Пластинку помещают в камеру со смесью растворителей: кислота уксусная ледяная Р-бензол Р-петролейный эфир Р (30:60:60). Когда фронт растворителей пройдёт около 13 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе, опрыскивают раствором 200 г/л кислоты фосфорномолибденовой Р в этаноле Р и продолжают проявление по методике, описанной для идентификации неполигидроксиантиоксидантов.

Хроматограмму оценивают, сравнивая положение пятен на хроматограмме испытуемого раствора с Рис 2.4.20.-2.

ш л й о •

Рисунок 2.4.20.-2. Типичные хроматограммы полигидроксиантиоксидантов (метод В)

1. — окрашенный раствор

2. — бутилированный гидроксианизол

3. — гваяковая смола

4. — нордигидрогваяретовая кислота

5. — метилгаллат

6. — этилгаллат

7. — пропилгаллат

8. — октилгаллат

9. — добецилгаллат А — жёлтый

В — красный С — синий

С. АНТИОКСИДАНТЫ, НЕИЗВЛЕКАЕМЫЕ МЕТАНОЛОМ

Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии на другой пластинке. Хроматографирование проводят по методике, описанной для неполигидроксиантиоксидантов, используя вместо испытуемого раствора (а) испытуемый раствор (b). Пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дихлорхинонхлоримида Р в этаноле Р. Пятна проявляются в течение 15 мин. Хроматограмму оценивают, сравнивая с Рис. 2.4.20 - 1. Зоны, отмеченные пунктиром, соответствуют а-токоферолу и бутилированному гидрокситолуолу. Пятна в- и у-токоферола находятся в зоне, соответствующей 2-(1,1-диметилэтил)-4-метоксифенолу.

Если в испытуемом веществе в существенном количестве присутствует бутилированный гидрокситолуол, его определяют по методу А.