2.6.2. Микобактерии

Если испытуемый образец может содержать микроорганизмы, отличные от микобактерий, его обрабатывают подходящим деконтаминирующим раствором, например, раствором ацетилцистеина и гидроксида натрия или раствором натрия лаурилсульфата.

На каждую из двух подходящих твердых питательных сред (например, сре­да Лёвенштейна-Йенсена или среда Миддлбрук 7Н10) наносят по 0,2 мл образца.

Эксперимент выполняют в трех повторностях. В подходящую жидкую питательную среду также в трех повторностях вносят по 0,5 мл образца. Все среды инкубируют при 37⁰С в течение 56 дней.

Устанавливают способность среды к обеспечению роста в присутствии ис­пытуемого продукта путем инокуляции подходящего штамма семейства Mycobac-terium, например, BCG, и, при необходимости, используют подходящий нейтрали­зующий агент.

Если в течение первых восьми дней инкубации наблюдается развитие по­сторонних микроорганизмов, испытание повторяют с одновременным проведени­ем испытания на бактериологическую стерильность.

Продукт выдерживает испытание, если в конце инкубационного периода ни в одной из пробирок не наблюдается роста микобактерий.

2.6.3. Испытания на посторонние вирусы с ис­пользованием куриных эмбрионов

Используют жидкую вакцину или восстанавливают подлежащее испытанию количество вакцины, высушенной из замороженного состояния, применяя указан­ную на этикетке или другую подходящую жидкость, содержащую в каждом случае соответствующие антибиотики. Если это предписано в частной статье, нейтрали­зуют моноспецифической антисывороткой. При необходимости разбавляют таким образом, чтобы 0,2 мл смеси содержали 10 доз вакцины. Смесь прививают двум группам по 10 куриных эмбрионов возрастом от 9 до 11 дней, полученных из групп, не содержащих указанных патогенов:

• 0,2 мл в аллантоисную полость каждого из яиц первой группы,

• 0,2 мл на хориоаллантоисную мембрану каждого из яиц второй группы.

В течение 7 дней ежедневно состояние яиц оценивают визуально путем просвечивания. Эмбрионы, погибающие в течение первых 24 часов, не учитыва­ют, считая, что их гибель вызвана неспецифическими причинами: результаты ис­пытания считают достоверными при условии, что не менее 6 эмбрионов из каждой группы выживают в течение более 24 часов после прививки. Все эмбрионы, по­гибшие более чем через 24 часа после прививки, а также выжившие в течение 7 дней, проверяют на наличие аномалий. Проверяют также хориоаллантоисные мембраны на наличие аномалий, аллантоисные жидкости - на наличие гемагглю-тинирующих агентов, а клетки, отделяемые путем центрифугирования от аллан-тоисных жидкостей, - на наличие вируса инфекционного бронхита с использова­нием метода флуоресцирующих антител. Выполняют дополнительный экспери­мент с эмбрионами. По отдельности отбирают образцы материала из живых и по­гибших эмбрионов и прививают каждый из образцов 10 эмбрионам каждым из вышеописанных методов. При этом материал хориоаллантоисных мембран дол­жен наноситься на хориоаллантоисные мембраны, а аллантоисная жидкость должна вводиться в аллантоисную полость. Яйца наблюдают в течение 7 дней и оценивают их состояние в соответствии с вышеприведенными указаниями. В слу­чае, если вакцина приводит к гибели или ненормальному развитию, она не вы­держивает испытание.