5.1.3. Эффективность антимикробных консервантов

Если лекарственное средство само по себе не обладает антимикробной активностью, в его состав могут быть введены антимикробные консерванты, в особенности в готовые лекарственные средства в виде водных растворов для предотвращения размножения или ограничения контаминации микроорганизмами, которая может произойти с продуктами при нормальных условиях хранения и использования, особенно с контейнерами на большое количество доз, и представлять опасность для пациента. Антимикробные консерванты не должны применяться в качестве альтернативы надлежащей производственной практики (GMP).

Эффективность антимикробных консервантов может усиливаться или ослабляться в результате взаимодействия с действующим веществом или другими компонентами готового лекарственного средства, а также с упаковочными или укупорочными материалами. Поэтому на протяжение срока годности следует контролировать антимикробную активность готового лекарственного средства, хранящегося в контейнере, с целью доказательства того, что она не снижается в процессе хранения. Такие исследования должны проводиться на образцах, извлеченных из контейнера непосредственно перед испытанием.

На стадии разработки лекарственного средства необходимо доказать, что антимикробная активность самого лекарственного средства или при необходимости лекарственного средства с консервантом обеспечивает надлежащую защиту от нежелательного воздействия, которые могут быть результатом микробного загрязнения лекарственного средства или размножения в нем микроорганизмов в процессе хранения или использования.

Эффективность антимикробной активности может быть продемонстрирована при помощи приведенного ниже испытания. Данное испытание не предназначено для использования в целях повседневного контроля.

ИСПЫТАНИЕ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ АНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ

Испытание состоит во внесении в готовое лекарственное средство по возможности находящееся в контейнере, количества подходящих микроорганизмов и хранении инокулированного образца при указанной ниже температуре, извлечении проб из инокулированных образцов через определенный промежуток времени и определении в нем числа микроорганизмов.

Эффективность консерванта в готовом лекарственном средстве считают удовлетворительной, если в условиях проведения испытаний, при хранении инокулированнных образцов при заданной температуре, в течение указанных промежутков времени наблюдается значительное уменьшение числа микроорганизмов. Критерии оценки, показывающие уменьшение числа микроорганизмов за определенный период времени, зависят от требуемой степени защиты готового лекарственного средства (см. Таблице 5.1.3.-1/2/3).

Тест-микроорганизмы

Aspergillus niger IMI 149 007 (ATCC 16404, IP 1431.83)

• BKMF-1119, # ВКПМ F-824

Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231, IP 48.72)

• ATCC-885-653

Pseudomonas aeruginosa NCIMB 8626 (ATCC 9027, CIP 82.118)

• ГИСК453

Staphylococcus aureus NCTC 10788 (NCIMB 9518, ATCC 6538, CIP 4.83)

• АТСС 6538-Р (FDA 209-P)

Необходимо применять один штамм бактерий, выбранные микроорганизмы могут дополняться другими штаммами или видами, которые могут представлять вероятное микробное загрязнение для лекарственного средства. Например, Escherichia coli [NCIMB 8545 (ATCC 8739, CIP 53.126, # АТСС 25922)] используется при испытании всех лекарственных средств для орального применения, а Zygosaccharomyces rouxii [NCYC 381 (IP 2021.92)] - для лекарственных средств для орального применения с высокой концентрацией сахара.

Подготовка посевного материала

Для подготовки к испытанию свежевыращенную исходную культуру каждого микроорганизма из указанных тест-микробов пересевают на поверхность плотной питательной среды В (2.6.12) в случае выращивания бактерий или плотной питательной среды С без добавления антибиотиков (2.6.12) в случае выращивания грибов. Культуры бактерий инкубируют при температуре 30-35°С в течение 18-24 ч; культуру Candida albicans инкубируют при температуре 20-25°С в течение 48 ч и культуру Aspergillus niger - при температуре 20-25°С в течение 7 дней до получения хорошо развитых спор. Для получения чистой культуры микроорганизмов могут потребоваться пересевы, однако рекомендуется ограничиться их минимально возможным числом.

Для приготовления суспензии бактериальных культур и культуры Candida albicans микробную массу смывают с питательной среды стерильной суспендирующей жидкостью, содержащей 9 г/л натрия хлорида Р и 0,1 г/л пептона Р, и переносят в подходящий сосуд. Затем с помощью той же жидкости доводят содержание микроорганизмов до 10⁸ в миллилитре. Для приготовления суспензии для рассеивания и переноса поверхностного роста в подходящий сосуд. Добавляют культуры Aspergillus niger используют стерильную суспендирующую жидкость, содержащую 0,9 г/л хлорида натрия Р и 0,5 г/л полисорбата 80 Р, и с ее помощью доводят содержание спор до приблизительно 10⁸ в одном миллилитре.

Из каждой суспензии немедленно отбирают подходящий образец и определяют число колониеобразующих единиц в 1 мл (КОЭ/мл) каждой суспензии методом прямого посева на чашки или методом мембранной фильтрации (2.6.12). Полученное значение служит для определения числа жизнеспособных микроорганизмов в инокуляте и сходного числа микроорганизмов при проведении испытания. Инокулят следует использовать немедленно после приготовления.

МЕТОДИКА

Для подсчета жизнеспособных микроорганизмов в инокулированных образцах используют ту же плотную питательную среду, которая была использована для первоначального выращивания соответствующих микроорганизмов.

Необходимо инокулировать каждый из контейнеров с испытуемым лекарственным ₅сре₆дством суспензией одного из тест-микроорганизмов до концентрации 10⁵-10⁶ КОЭ в 1 мл или 1 г лекарственного средства. Объем суспензии должен составлять не более 1% от объема образца. Образец тщательно перемешивают для обеспечения равномерного распределения микроорганизмов.

Инокулированные образцы лекарственного средства выдерживают при температуре 20-25°С в защищенном от света месте. Из каждого испытуемого образца отбирают пробы (обычно 1 мл или 1 г) непосредственно после инокуляции и через указанные интервалы времени (см. Таблицы 5.1.3-1/2/3) определяют число жизнеспособных микроорганизмов методом посева на чашки или методом мембранной фильтрации (2.6.12). Антимикробную активность готового лекарственного средства следует устранить путем разведения, фильтрации или с помощью подходящего инактиватора. При использовании инактиватора следует подтвердить путем контрольных опытов, что его присутствие не влияет на жизнеспособность микроорганизмов. Следует подтвердить пригодность методики для доказательства требуемого снижения числа жизнеспособных микроорганизмов.

КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ

Критерии оценки антимикробной активности приведены в Таблице 5.1.3.-1/2/3 в виде логарифма уменьшения числа жизнеспособных микроорганизмов.

Таблица 5.1.3.-1.

■ Лекарственные средства для парентерального и офтальмо­логического применения

Lg уменьшения