5.3. Статистические методы обработки результатов анализа

5.3.1. Статистический анализ результатов биологических исследований и количественных определений

ВВЕДЕНИЕ

Данная глава является руководством для планирования тестов биологической активности, описанных в Фармакопее и для анализа их результатов. Она предназначе­на для специалистов, у которых статистика не является основной специальностью и сферой деятельности, в том случае, если они несут ответственность за проведение количественного анализа или интерпретацию результатов этих анализов, и не могут прибегнуть к помощи и советам специалистов в области статистики. Приведенные в данной главе методы расчета не являются обязательными при выполнении количест­венных определений биологической активности, предусмотренных Фармакопеей. До­пускается использование альтернативных методов при условии, что они не уступают по надежности методам, описанным в данной главе. Существует широкий спектр про­граммного обеспечения, которое может быть полезно в зависимости от средств, дос­тупных аналитику, и от его знаний и опыта.

Следует обращаться за помощью к профессионалам в ситуациях, когда:

• требуется детальная проработка плана и методов анализа, подходящих для на­учного исследования или разработки нового лекарственного средства;

• анализ требуется для расширенных нелинейных графиков зависимости доза-эффект, например с такой ситуацией можно столкнуться при проведении коли­чественных иммунологических определений;

• нельзя придерживаться ограничений, накладываемых данной главой на план ко­личественного определения, например, необходимость корректировки планов количественного определения может быть вызвана специфическими лаборатор­ными условиями, или невозможностью применения равных количеств одинаково раздельных доз.

1.1. Общие положения и точность

Биологические методы анализа применяют для количественного определения та­ких субстанций и препаратов, активность которых не может быть корректно оценена при помощи химических или физических методов анализа. Везде, где возможно, в ос­нову количественных определений положен принцип сравнения со стандартным пре­паратом, с тем, чтобы определить какое количество анализируемой субстанции даст такой же биологический эффект как определенное количество (Единица) стандартного препарата. Существенным условием проведения таких биологических количественных определений является то, что анализ стандартного препарата и исследуемой субстан­ции должен быть выполнен в одно и тоже время и при идентичных условиях.

Для некоторых количественных определений (например, определения титра виру­са) активность испытуемого образца не выражается относительно стандарта. Такой тип количественного определения рассмотрен в Разделе 4.5.

Любая оценка активности, полученная в ходе биологического количественного оп­ределения включает случайную ошибку, обусловленную свойственной биологическим реакциям изменчивостью и, если это возможно, следует провести вычисление ошибки, результатов каждого количественного определения, даже в случае использования официального метода определения. В этой связи ниже приведены методы планирова­ния количественных определений и вычисления их ошибок. Каждый раз, перед тем как остановиться на том или ином статистическом методе, следует провести предвари­тельное исследование с определенным числом повторений, чтобы убедиться в приме­нимости этого метода.

Доверительный интервал активности характеризует точность, с которой была оценена активность при количественном определении. Он рассчитывается исходя из плана эксперимента и объема выборки. При биологических количественных определе­ниях обычно выбирается 95% доверительный интервал. Для расчета границ этого ин­тервала применяются методы математической статистики, с тем, чтобы гарантировать утверждение, что существует 95% вероятность того, что действительное значение ак­тивности находится в данном интервале. Является ли эта точность приемлемой для Фармакопеи, зависит от требований, установленных в частной статье на конкретный препарат.

Термины «среднее» и «стандартное отклонение» используются в данном разделе в соответствии с их определением в большинстве руководств по биометрии. Термины «заявленная активность» или «активность, указанная в маркировке», «уста­новленная активность», «предполагаемая активность», «отношение активностей» и «рассчитанная активность» используются в данном разделе для обозначения следую­щих понятий:

• «заявленная активность» или «активность, указанная в маркировке»: для готового препарата - номинальное значение, установленное на основании известной актив­ности исходного материала; для исходного материала - активность, установленная производителем;

• «установленная активность» - активность стандартного препарата;

• «предполагаемая активность»: временно установленная активность испытуемого препарата, на основании которой рассчитываются дозы, которые были бы эквива­лентны дозам используемого стандартного препарата;

• «отношение активностей» испытуемого препарата; отношение равноактивных доз стандартного препарата и испытуемого препарата в условиях количественного оп­ределения;

• «рассчитанная активность» - активность, рассчитанная на основании данных коли­чественного определения.

В разделе 9 (глоссарий символов) приведены наиболее важные, используемые в данной главе символы. Если в тексте используется символ, не приведенный в этом разделе, или символ используется в другом значении, то его определение дается в той части текста.