Окраска разведенным карболовым фук­сином

Техника. На зафиксированный мазок наносят фуксин Циля, разведенный непосредственно перед окраской, дистилли­рованной водой в соотношении 1:10. Выдерживают 1-2 минуты, после чего смывают водопроводной водой, высушивают и микро­скопируют.

Микроскопическая картина. Все клетки равномерно окра­шиваются в розово-красный цвет.

Приготовление и окраска препаратов для люминесцентной микроскопии

Препараты для люминесцентной микроскопии готовят так же, как для световой. Это относится и к их фик­сации. Окраска препаратов отличается тем, что для люми­несцентной микроскопии применяют специальные красители – флуорохромы. Их отличительная особенность – способность све­титься под воздействием ультрафиолетовых и сине-фиолетовых лучей. Среди флуорохромов встречаются самые разнообразные органические вещества. Для окраски микроскопических препаратов применяют очень слабо концентрированные (1:500-1:100000) растворы флуорохромов. Растворы готовят на дистиллированной воде, изотоническом растворе хлорида натрия или буферных смесях и хранят в тем­ной склянке, избегая действия света.

Сложные или дифференциальные методы окраски микробов Дифференциально-диагностический метод окраски по Граму

Наиболее употребительной среди дифференциальных методов является окраска по Граму. При этом методе выявляется спо­собность бактерий удерживать краситель (грамположительные бактерии) или обесцвечиваться в спирте (грамотрицательные бактерии), что связано с различиями в химическом составе и структуре их клеточных стенок.

Для выполнения окраски по Граму надо приготовить следующие растворы.

Карболовый раствор генцианового фиолетового или кристал­лического фиолетового: 1) красителя 1 г, 96% спирта 10 мл, кристаллической карболовой кислоты 2 г, дистиллированной воды 100 мл (растирают в ступке краситель с карболовой ки­слотой до консистенции кашицы, прибавляют небольшими пор­циями спирт и окончательно разводят водой, сливают в бутыль, оставляют на сутки, затем фильтруют) или 2) насыщенного (4,8%) спиртового раствора красителя 10 мл, 2% карболовой воду 100 мл.

Фуксин Пфейффера. См. разведенный фуксин.

Раствор Люголя (в модификации Грама): йодида калия 2 г, дистиллированной воды 10 мл, йода кристаллического 1 г. Смесь хорошо укупоривают, оставляют на сутки, после чего до­бавляют дистиллированной воды 300 мл.

Техника. На фиксированный мазок накладывают кусочек фильтроваль­ной бумаги, и на нее наливают карболовый раствор генцианового фиолетового на 0,5-1 мин. Сливают краситель и, не смывая, на­ливают раствор Люголя на 1 мин. Сливают раствор Люголя и прополаскивают препарат в 95% спирте в течение 0,5-1 мин, пока не перестанет отходить краситель. Промывают водой. До­полнительно окрашивают разведенным фуксином в течение 0,5-1 мин. Краситель сливают, препарат промывают и высушивают.

Видоизменение окраски Грама по а. И. Синеву

Заготовляют полоски фильтровальной бумаги, пропитанной 1% спиртовым рас­твором кристаллического фиолетового и высушенной.

Техника.

1. На фиксированный мазок наносят полоску фильтровальной бумаги, приготовленной по методу Синева, и несколько капель воды на 1-2 минуты.

2. Затем снимают пинцетом бумагу. Не промывая препарат водой, сливают краску и наносят раствор Люголя на минуту до полного почернения.

3. Сливают раствор Люголя, не промывая водой, погружают препарат в стаканчик с 96 спиртом на 20-30 секунд до отхож­дения фиолетовых струй краски.

4. Препарат тщательно промывают водой для удаления спирта.

5. Докрашивают фуксином Пфейффера в течение 3 минут. Краску смывают водой, препарат высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розово-красный (рис.14).