Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде

Мясо-пептонный бульон (или бульон Сабуро, или другой, на котором растет изучаемый микроб) разливают по 1 мл в пробирки, расставленные в штативы по 10 в ряду. В первую пробирку вносят 1 мл раствора антибактериального химиопрепарата в нужной концентрации (для антибиотиков удобной концентрацией для основного раствора является 200 мкг/мл или ед/мл). Основные растворы антибиотиков стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 недели.

После тщательного перемешивания переносят мерной пипеткой 1 мл из этой пробирки во вторую, перемешивают и переносят тоже количество смеси из второй в третью и т. д. до девятой пробирки, из которой 1 мл выливают, чтобы во всех пробирках объем жидкости был одинаков. Десятая пробирка, не содержащая препарат, служит контролем на рост культуры микроорганизма.

После этого во все пробирки, содержащие серийно разведенный препарат, и в контрольную пробирку вносят одинаковое количество во взвеси тест-культуры. Для этого 18-ти часовую культуру (для микроорганизмов, рост которых замедлен, используют 48-ми часовую культуру) испытуемого микроба на косом агаре смывают физиологическим раствором, доводят до густоты 5 ЕД по стандарту мутности с последующим разведением до нужного количества микробных клеток в 1 мл и вносят в пробирки с серийно разведенным препаратом. Результаты учитывают, определяя наличие или отсутствие роста микроба в среде, содержащей различные разведения антибактериального химиопрепарата. Последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении испытуемого штамма и указывает на степень его чувствительности. Если среда помутнела во всех пробирках, то испытуемый микроб устойчив к максимально взятой в опыт концентрации антибактериального химиопрепарата. Отсутствие роста во всех пробирках, кроме контрольной свидетельствует о том, что МПК препарата в отношении микроба ниже используемой концентрации.

Для определения бактерицидной концентрации из 2-3 последних пробирок с отсутствием видимого роста производят посев на агар или бульон. Через 24-48 часов инкубации в термостате отмечают ту наименьшую концентрацию антибактериального химиопрепарата в пробирке, посев из которой не дал роста, и принимают за минимальную бактерицидную концентрацию (МБК).

Метод двукратных серийных разведений в плотной питательной среде

Принцип опыта тот же, что и при определении чувствительности микроорганизмов к антибактериальным химиопрепаратам в жидкой питательной среде.

Перед постановкой опыта агар расплавляют в водяной бане и охлаждают до 50-60 º С.

Готовят двукратные разведения антибактериального химиопрепарата, после чего вносят по 1 мл каждого разведения в пробирку, содержащую 4 мл агарированной расплавленной и охлажденной среды.

Затем пробирки скашивают для застывания агара, а на поверхность плотной среды петлёй засевают взвесь тест-культуры.

Для постановки опыта в чашках Петри берут 1 объем, содержащий определённое разведение препарата и 9 объемов расплавленного и остуженного агара, тщательно перемешивают в пробирках и выливают в чашку Петри. В контрольную пробирку с агаром вместо раствора антибактериального химиопрепарата вносят 1 объем стерильной дистиллированной воды. Приготовленные таким образом чашки, каждая из которых содержит определенную концентрацию препарата, делят на секторы, на каждый из которых засевают испытуемый штамм. Посев делают петлёй или пастеровской пипеткой.

Для посева часто пользуются также специальным штампом-репликотором, позволяющим нанести на поверхность агара одновременно 25-32 испытуемые культуры. Посевы инкубируют в термостате при t-37ºС в течение 18-24 часов, после чего учитывают результаты.

За МПК препарата для данного штамма принимают ту, при которой отсутствуют признаки роста на поверхности агара (или вместо бляшки имеется рост единичных колоний).