Окрашивание ядерного аппарата Метод Фельгена

Техника. Препарат фиксируют жид­костью Карнуа в течение 10-30 мин, промывают 80-ным спиртом и проводят через нисходящие концентрации спиртов. Реакция проявляется только в гидролизованном материале. Последова­тельность гидролиза: препарат помещают на 2-3 мин в 1 N pаствор соляной кислоты при комнатной температуре, затем на 5-6 мин в 1 N pаствор соляной кислоты, нагретой до 60С, и снова в первый раствор на 1-2 мин, затем помещают в реактив Шиффа на 2-3 ч. Реактив Шиффа готовят следующим образом: 0,5 г основного фуксина растворяют в 90 мл кипящей дистиллирован­ной воды, охлаждают до 50С, фильтруют и прибавляют 3 мл кон­центрированной соляной кислоты. Отдельно в 10 мл холодной воды растворяют 2 г безводного или 4 г кристаллического сульфата натрия. Полученный раствор сульфата приливают к раствору фуксина, охлажденному до 25С.

Второй способ приготовления раствора Шиффа: 1 г основного фуксина для фуксинсернистой кислоты растворяют в 200 мл кипя­щей дистиллированной воды, охлаждают до 50С, фильтруют и до­бавляют 20 мл 1 N cоляной кислоты, охлаждают до 25С и до­бавляют 1 г метабисульфита натрия или калия. Реактив хранят на холоду в широкой склянке с притертой пробкой. Реактив считается пригодным, пока он сохраняет запах сернистого газа и цвет бледного чая (розовая окраска является цветом непри­годности).

Препарат промывают по 15-20 мин в трех порциях сернистых вод и затем в дистиллированной воде. Способ приготовления сернистых вод: 1) к 200 мл дистиллированной воды добавляют 4 мл концентрированной соляной кислоты; отдельно в 25 мл дис­тиллированной воды растворяют 4 г безводного или 8 г кри­сталлического сульфата натрия, приливают этот раствор к подкисленной воде, взбалтывают и дают отстояться или 2) 0,5 г метабисульфита натрия или кали, 5 мл 1н. соляной кислоты по­мещают в колбу и доводят объем раствора до 100 мл дистилли­рованной водой. Для получения более контрастных препаратов их докрашивают 0,1-0,25-ным раствором, лучше слабо подкисленным, светло-зеленого или водного голубого (вассерблау). Препарат промывают водой, высушивают, проводят через ряд спиртов восходящей концентрации до абсолютного, ксилол и по­мещают в бальзам.

Микроскопическая картина. Ядерные элементы окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, протоплазма при докрашивании приобретает зеленый оттенок. Лучше всего окрашиваются конидии несовер­шенных грибов.

Трехцветное окрашивание по Флеммингу

Техника. Препарат фиксируют любым способом, помещают на 5-12 ч в 1-ный раствор сафранина, который готовят смешиванием 1-ного раствора водорастворимого сафранина и воды (1:1); про­мывают в воде, затем в спирте, снова трехкратно в воде по 15 мин, затем помещают в 2-ный водный раствор генцианового фиолетового на 30 мин, промывают водой и помещают в 1-ный водный раствор оранжа на 1-3 мин, после чего промывают в гвоздичном масле.

Микроскопическая картина. Протоплазма окрашивается в розовый цвет, ахроматиновые элементы клетчатки – в фиолетовый, хроматино­вые структуры – в красный.