- •Руководство
- •Раздел «морфология микроорганизмов» Тема: Виды микроскопии: назначение и принципы применения
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Светопольная микроскопия. Устройство светопольного микроскопа ипорядок работы с ним
- •Темнопольная микроскопия
- •Фазово-контрастная и аноптральная микроскопия
- •Люминесцентная микроскопия
- •Электронная микроскопия
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Подготовка предметных и покровных стекол
- •Исследование микроорганизмов в живом состоянии
- •Препараты фиксированных окрашенных клеток. Приготовление мазка и фиксация препарата
- •Окраска препаратов
- •Виды красителей
- •Методы окраски
- •Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов
- •Окраска разведенным карболовым фуксином
- •Приготовление и окраска препаратов для люминесцентной микроскопии
- •Сложные или дифференциальные методы окраски микробов Дифференциально-диагностический метод окраски по Граму
- •Видоизменение окраски Грама по а. И. Синеву
- •Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробов
- •Окраска по Цилю-Нильсену
- •Флуорохромирование аурамином
- •Модификация Шеффлера и Фултона
- •Окраска по Биттеру
- •Окраска капсул
- •Метод Бурри-Гинса
- •Способ Михина
- •Метод Леффлера
- •Серебрение по Морозову
- •Метод Грея
- •Окраска по Шенку
- •Метод Петрука
- •Окраска включений в бактериях Окраска метахроматических зерен (волютина)
- •Метод Нейссера
- •Метод Пью
- •Окраска по Мейеру
- •Флуорохромирование волютина корифосфином
- •Окраска по Раскиной
- •Окраска на грамофильную зернистость Метод Муха
- •Метод Козлова
- •Выявление клеточной стенки бактерий
- •Метод Пикарского
- •Окраска риккетсий Метод Романовского-Гимза
- •Метод Здродовского
- •Окраска хламидий
- •Метод Хайденхайна
- •Окраска йодом и йод-эозином
- •Негативная окраска по Бурри
- •Дифференциальное окрашивание мицелия
- •Окрашивание ядерного аппарата Метод Фельгена
- •Трехцветное окрашивание по Флеммингу
- •Окрашивание гематоксилином Делафильда
- •Окрашивание гематоксилином и эозином (или эритрозином)
- •Микроскопия вирусов
- •Окраска препаратов Окраска по Романовскому
- •Окраска по Муромцеву
- •Окраска по Морозову
- •Окраска по Селлеру
- •Окраска по Пигаревскому
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: “физиология микроорганизмов”
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Требования, предъявляемые к питательным средам
- •Выделение чистых культур микроорганизмов.
- •Методы выделения чистых культур аэробных микроорганизмов.
- •Методы, основанные на принципах механического разделения микроорганизмов
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах
- •Пигменты микроорганизмов
- •Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах
- •Второй этап выделения чистой культуры
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Сахаролитические ферменты микробов
- •Протеолитические ферменты микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Третий этап выделения чистой культуры.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Методы культивирования анаэробных микроорганизмов
- •Физические методы
- •Химический метод
- •Биологический метод
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Методы санитарно-микробиологического анализа воды.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Стерилизация. Методы стерилизации.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: ”химиотерапия инфекционных заболеваний ”.
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Питательные среды для определения чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом “бумажных дисков”
- •Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде
- •Метод двукратных серийных разведений в плотной питательной среде
- •Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в жидких средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в плотных средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к нитрофурановым препаратам методом разведений в жидких средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к энтеросептолу методом разведений в жидких средах
- •Ускоренные методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: "фитопатогенные микроорганизмы. Методы микробиологического контроля лекарственного сырья и готовых лекарственных средств
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Определение микробиологической чистоты лекарственного сырья и готовых лекарственных средств, не обладающих антимикробными свойствами
- •Подготовка образцов для анализа
- •Питательные среды
- •Определение общего числа бактерий
- •Определение количества плесневых и дрожжевых грибов
- •Определение присутствия бактерий семейства Enterobacteriaceae
- •Определение присутствия s. Aureus и p.Aeruginosa
- •Определение микробиологической частоты нестерильных лекарственных средств, обладающих антимикробным действием
- •Количественное определение бактерий и грибов
- •Количественное определение бактерий сем. Enterobacteriaceae (e.Coli)
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки.
- •Литература
- •Определение стерильности лекарственных средств, субстанций, вспомогательных веществ методом прямого посева
- •Определение стерильности лекарственных средств, субстанций и вспомогательных веществ методом мембранной фильтрации
- •Задания к лабораторному занятию
- •Определение стерильности лекарственного средства
- •Раздел: « инфекция и иммунитет»
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Экспериментальная инфекция
- •Выбор и подготовка к заражению лабораторных животных
- •Методы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие зараженных лабораторных животных
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Основы иммунодиагностики
- •Сбор иммунологического анамнеза и характеристика основных иммунопатологических синдромов
- •Диагностические тесты, проводимые непосредственно у больного (тесты in vivo)
- •Основные тесты лабораторной иммунодиагностики
- •Методы исследования лимфоцитов
- •Методы, основанные на изучении поверхностных маркеров
- •Исследование функционального состояния лимфоцитов
- •Реакция бласттрансформации лимфоцитов (рбтл)
- •Оценка интенсивности продукции цитокинов
- •Оценка гиперчувствительности замедленного типа
- •Оценка функционального состояния фагоцитов
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Реакции антиген-антитело. Химические основы
- •Определение аффинности антител
- •Основные методы выявления антител и антигенов
- •Методы, основанные на реакции преципитации
- •Двойная радиальная иммунодиффузия
- •Иммуноэлектрофорез
- •Электроиммунный анализ
- •Встречный электрофорез
- •Методы, основанные на реакции агглютинации
- •Реакция непрямой агглютинации (гемагглютинации) (рнга)
- •Реакция торможения непрямой гемагглютинации (ртнга)
- •Методы, основанные на использовании меченых реагентов
- •Радиоиммунологические методы
- •Метод иммунного окрашивания после переноса на нитроцеллюлозные мембраны (иммуноблоттинг)
- •Иммуноферментные методы
- •Иммунофлуоресцентные методы
- •Применение двойной флуоресцентной метки
- •Реакция лизиса
- •Реакция связывания комплемента
- •Реакция нейтрализации
- •Феномен иммуноклеточного прилипания
- •Задания к лабораторному занятию.
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Общая характеристика, основы производства и применения бактерийных и вирусных препаратов.
- •Этапы создания искусственной вакцины
- •Аспекты gmp
- •Персонал
- •Помещения и оборудование
- •Помещения для животных и уход за ними
- •Документация
- •Производство Исходные материалы
- •Партии посевного материала и система банков клеток
- •Принципы работы
- •Контроль качества
- •Методы и условия введения препаратов
- •Методика введения гетерогенных (из крови животных) сывороток и иммуноглобулинов с предварительной внутрикожной пробой.
- •Реактогенность бактерийных и вирусных препаратов
- •Общая характеристика реактогенности
- •Оценка и учет послепрививочных реакций
- •Основные клинические формы поствакцинальных осложнении
- •Иммуномодулирующие препараты
- •Иммуностимулирующие препараты
- •Нестероидные противовоспалительные препараты (нпвп)
- •Иммунодепрессанты
- •Задания к лабораторному занятию
- •Министерство здравоохранения Украины Национальная фармацевтическая академия Украины Кафедра микробиологии
- •1 Мл содержит 1 млрд микробных тел
- •Иммунизация мышей антигеном.
Задания к лабораторному занятию
Изучите выросшую культуру на скошенном агаре, приготовьте мазок, окрасьте по Граму.
Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. В случае выраженного полиморфизма, присущего некоторым видам бактерий, в мазках из чистой культуры наряду с типичными встречаются и другие формы клеток.
Посейте чистую культуру микроорганизмов на среды Гисса.
Пробирки с набором сред Гисса поставьте в штатив в один ряд. На каждой пробирке подпишите название сахара, содержащегося в среде. На первой пробирке каждого ряда кроме названия сахара укажите исследуемую культуру. Произведите посев.
Определите наличие протеолитической активности микробов на мясо-пептонном желатине.
Посев произведите уколом, погружая петлю с исследуемой культурой вглубь питательной среды до дна пробирки.
Там, где под действием протеолитических ферментов микробов произошло расщепление белков желатина, отмечается разжижение питательной среды.
Определите индолообразование выделенной культуры микроорганизмов.
Для выявления индолообразования петлю исследуемой культуры засейте в пробирку с мясо-пептонным бульоном. После посева в пробирку внесите полоску индикаторной бумаги, пропитанную раствором щавелевой кислоты, так, чтобы индикаторная бумага не касалась питательной среды. Посевы инкубируют в термостате 24-48 ч. при температуре 37ºС. Образование индола определяют по окрашиванию бумаги в бледно-розовый цвет.
Определите способность изучаемой культуры микроорганизмов выделять сероводород.
Петлю исследуемой культуры засейте в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Затем в пробирку внесите пропитанную ацетатом свинца полоску индикаторной бумаги. В положительных случаях образующийся в культуре сероводород вступает в соединение с бесцветным ацетатом свинца и превращается в сульфат свинца, который придает индикаторной бумаге черно-бурое окрашивание.
Тема: Дыхание бактерий. Брожение. Методы выделения чистых культур анаэробов.
Цель: Освоить методы выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов.
Вопросы для самоподготовки
Типы дыхания микроорганизмов.
Сущность процесса дыхания микробов.
Особенность процесса брожения.
Принципиальное различие дыхания и брожения, как энергетических процессов бактериальной клетки.
Питательные среды для культивирования анаэробов.
Методы культивирования анаэробов:
а) физический;
б) химический;
в) биологический.
Литература
Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробиология. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 57-58.
Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 36-42.
Как отмечалось в разделе о питании бактерий, поступающие в микробную клетку питательные вещества трансформируются в составные части цитоплазмы, ядрные субстанции, оболочки клетки и т. д. Для этих сложных синтетических процессов необходима затрата определённого количества энергии, которую микробная клетка должна получать для поддержания своей жизнедеятельности также непрерывно, как и питательные вещества.
Затрата энергии необходима не только для синтетических процессов, но и для всех других многочисленных проявлений жизнедеятельности бактерий. Сюда относятся рост и размножение микробов, их движение, образование спор и капсул, выработка токсинов.
Микробные клетки всю необходимую энергию получают за счет экзотермических химических реакций, осуществляемых путём окисления различных химических соединений, обладающих большими запасами потенциальной энергии.
Совокупность биохимических процессов, в результате которых освобождается энергия, необходимая для жизнедеятельности клеток, называется дыханием или биологическим окислением. Бактериальные клетки, имея относительно простую структуру и чрезвычайно малые размеры, отличаются большим разнообразием типов дыхания.
В дыхании микроорганизмов определяющую роль играют окислительные ферменты, причем различные типы дыхания микробов связаны с определённым набором их ферментов.
В химизме дыхательных процессов всех типов дыхания микроорганизмов имеется много общего, однако, по специфичности определенных стадий реакции выделяет aэрoбный, анаэробный и смешанный тип дыхания.
Во всех случаях первым этапом дыхания является отнятие водорода от субстрата с помощью специфических ферментов - дегидрогеназ. А так как в структуре атома водорода на орбите имеется один электрон, то процесс отнятия электрона водорода от субстрата расценивается как окислительный субстрат – H2 + дeгидpoгинaзa oкиcленый субстрат + дегидрогеназа – Н2.
Эта реакция является примером реакции окисления - восстановления. Сущность окисления состоит в потере электронов окисляющимся веществом, тогда как сущность восстановления состоит в присоединении электронов восстанавливающимся веществом.
В приведенной выше реакции фермент дегидрогеназа восстанавливается вследствие присоединения электронов водорода субстрата.
Последовательность биохимических реакций в протекании обменных процессов в бактериальной клетке возможна благодаря изменениям окислительно-восстановительного потенциала (гН2), под которым понимают способность вещества отдавать или получать электроны.
Окислительно-восстановительный потенциал зависит от температуры, pH среды и других причин. Он может изменяться в зависимости от аэробиоза или анаэробиоза. Строгие анаэробы растут при гН2 - 0-12, факультативные анаэробы при 0-20, аэробы при гН2 - 14-20.
Бактерии в большинстве случаев получают необходимую энергию для своей жизнедеятельности путём окисления углеводов и некоторых органических кислот.
У аэробов процесс расщепления углеводов происходит путём окислительных реакций. При этом вещество разлагается до самых простых соединений – Н2О, CO2 и др. с выделением большого количества тепловой энергии.
Процесс аэробного расщепления одной грамм-молекулы глюкозы можно представить следующим образом:
С6H12О6 + 6O2 = 6CO2 + 6Н2О + 674 калории.
В анаэробных условиях расщепление вещества происходит за счёт сложных внутримолекулярных химических превращений в бактериальной клетке, которое обеспечивается особой системой ферментов. Расщепление углеводов в анаэробных условиях называется процессом брожения. Пастер показал, что брожение, в зависимости от видов микробов, которые его обусловливают, может быть спиртовым, маслянокислым, уксуснокислым. Это значит, что в процессе брожения образуется не только углекислый газ и вода, но и ряд более сложных продуктов: винный спирт, масляная или уксусная кислоты. Количество освобождающейся энергии в процессе брожения намного меньше, чем при аэробном дыхании.
Та же грамм-молекула глюкозы под действием дрожжевых клеток в анаэробных условиях расщепляется с освобождением всего лишь 27 калорий
С6Н12О6 2С2Н5ОН + 2СО2 + 27 калорий.
Маслянокислые бактерии расщепляют грамм-молекулу глюкозы с образованием 15 калорий.
С6Н12О6 CH3CH2CH2COOH + 2CO2 + 2H2 + 15 калорий.
Общность процессов аэробного дыхания и брожения выражается в том, что в обоих случаях расщепление углеводов до определённого момента идет по одному пути и сопровождается появлением одних и тех же промежуточных продуктов и лишь на конечных этапах в случаях анаэробных процессов распад углевода идёт до спирта, молочной кислоты или других продуктов неполного окисления, а при аэробном - до полного окисления т. е. до углекислоты и воды.
В энергетическом отношении аэробное дыхание целесообразнее анаэробного. Так, если при аэробном процессе окисление глюкозы до С02 и Н2О освобождается 674 калорий, то при спиртовом брожении - 27 калорий, а при маслянокислом всего лишь 15 калорий. Это объясняется тем, что конечные продукты, получаемые в результате анаэробного окисления, представляют собой сложные органические соединения, имеющие большой запас энергии. Это приводит к тому, что значительная часть освобождающейся при анаэробном дыхании улетучивается в виде тепла и только 30 % выделившейся энергии используется в процессах жизнедеятельности бактерий.