Определение стерильности лекарственных средств, субстанций, вспомогательных веществ методом прямого посева

Испытуемое лекарственное средство в виде раствора вносят в стерильные колбы (пробирки) со средами в соотношении 1:10 исходя из объема одной контролируемой единицы. При объеме менее 1 мл высевают весь объем; 1-4 мл – 1 мл, 5-19 мл – 2 мл; 20 – 100 мл – 2-4 мл; более 100 мл -10 мл.

Параллельно ставят контроли на нейтрализацию возможного антимикробного действия либо ведением соответствующего инактиватора, либо разведением препарата (см. вышеописанные способы устранения антимикробного действия). Дополнительно ставят контроль роста тест-штаммов без препарата. При этом в среды добавляют по 0,1 мл взвеси суточных тест – штаммов: S.aureus, E.coli, B.subtilis, C.albicans (посевная доза 1000 бактерий).

Посевы инкубируют 14 дней в тиогликолевой среде при температуре 32,5 2,5С, в среде Сабуро – при 22,52,5С.

Если после 14-х дневной инкубации в опытных колбах (пробирках) нет микроорганизмов, а в контрольных есть, лекарственное средство считается стерильным.

Наличие роста микроорганизмов в питательных средах оценивают визуально по появлению мутности, пленки, осадка, других макроскопических изменений. Выявленный рост микроорганизмов необходимо подтвердить микроскопией мазков, окрашенных по Граму. При наличии роста микроорганизмов хотя бы в одной опытной пробирке (колбе) препарат считается не стерильным.

При испытании на стерильность мазей или растворов лекарственных средств в маслах в колбу объемом 250 мл, содержащую стеклянные бусы, вносят асептически 0,1 г (мл) образца, 100 мл 1/15 М фосфатного буфера рН 6,8-7,0 и эмульгатор твин- 80 в концентрации 2,5 % (в мази на водорастворимой основе эмульгатор не вносят). Содержимое колбы подогревают до 411С, встряхивают до получения однородной эмульсии, после чего вносят в колбу с 40 мл тиогликолевой среды и 5 мл – в колбу с 40 мл среды Сабуро. Дальнейший ход исследования такой же, как при исследовании на стерильность растворов.

Определение стерильности лекарственных средств, субстанций и вспомогательных веществ методом мембранной фильтрации

Метод используется в основном для определения стерильности лекарственных средств, обладающих антимикробным действием. По сравнению с прямым посевом метод мембранной фильтрации более надежен и экономичен.

Подготовку образцов и фильтрационной установки осуществляют, как описано в разделе «Определение микробиологической чистоты нестерильных лекарственных средствах методом мембранной фильтрации».

Растворы (суспензии, эмульсии) пропускают через две мембраны по 10 мл через каждую. После фильтрации мембраны отмывают 3-5 порциями стерильного раствора натрия хлорида изотонического 0,9% по 100 мл (при определении стерильности растворов) или растворителя, содержащего твин-80 (при испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах). Затем мембраны извлекают, разрезают стерильными ножницами на две половины – одну помещают в колбу со 100 мл тиогликолевой среды, другую – в колбу со 100 мл среды Сабуро, выдерживают при температуре 32,2,5С (тиогликолевая среда) и 22,52,5С (среда Сабуро) в течение 7 суток, ежедневно осуществляя визуальной контроль. При отсутствии роста микроорганизмов считают, что препарат отвечает требованиям на стерильность. В случае роста микроорганизмов опыт повторяют с удвоенным количеством образцов и питательных сред.