Реакция нейтрализации

В основе этой реакции лежит способность специфических антител нейтрализовать токсическое действие антигена.

Роль антигена может выполнять микробный экзотоксин. В этом случае обезвреживание токсина в ходе физико-химической реакции нейтрализации происходит за счет связывания его свободных аминогрупп, что приводит к потере токсичности.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Если антиген – вирусный материал, антитела нейтрализуют инфекционное и цитопатическое действие вирусов в чувствительных к вирусу живых системах.

Реакция нейтрализации инфекционного и цитопатического действия вирусов воспроизводится в чувствительных к вирусу живых системах. Из материала, содержащего вирус, готовят серийные разведения и добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным в инструкции. Смесь инкубируют 30-60 минут при температуре 37С, после чего заражают ею культуру ткани, куриные эмбрионы или лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система, зараженная вирусом обработанным нормальной сывороткой.

Положительной считают РН при отсутствии ЦПД в культуре клеток, изменений в куриных эмбрионах, а также заболнвания или гибели животных. На основании результатов РН определяют индекс нейтрализации – отношение титра вируса в контроле к титру вируса в опыте. Если индекс нейтрализации менее 10 – реакция отрицательная, от 11 до 49 – сомнительная, от 50 и выше – положительная (достоверное соответствие вируса антисыворотке).

Наиболее чувствительным вариантом РН является подавление вирусного бляшкообразования под действием вирусспецифической антисыворотки (реакция редукции вирусных бляшек). РН позволяет определить видовую и типовую принадлежность вируса.

Феномен иммуноклеточного прилипания

Метод, разработанный Г.Дж.В.Носселом с соавторами (1961), основан на способности бактерий прилипать к поверхности малых лимфоцитов – клеток, вырабатывающих специфические антитела после иммунизации животных соответствующими микроорганизмами, и получил название иммуноклеточного прилипания или скучивания. Феномен иммуноклеточного прилипания был использован для дальнейшего совершенствования методов выявления клеток, образующих антитела к антигенам микробного происхождения. В частности, заслуживает внимание модификация метода с использованием в качестве антигена эритроцитов, нагруженных различными микробными гаптенами. Такие эритроциты приобретают способность специфически прикрепляться в опытах in vitro к поверхности изолированных лимфоидных клеток животного, иммунизированного тем микроорганизмом, из которого выделен гаптен. При этом под микроскопом удается наблюдать так называемые розетки, каждая из которых представляет собой лимфоидную антителопродуцирующую клетку, окруженную прочно приставшими к ней эритроцитами. Просмотрев в общей сложности 30004000 лимфоидных клеток в нескольких препаратах, определяют процент розеткообразующих клеток, адсорбировавших не менее двух эритроцитов, - процент адсорбции. Описанный метод был разработан Я.С.Шварцманом и А.В.Исполатовой (1966) и получил название непрямой гемадсорбции по аналогии с реакцией непрямой гемагглютинации. Реакция непрямой гемадсорбции по чувствительности не уступает реакции прилипания бактерий и превосходит ее по специфичности, особенно в тех случаях, когда изучают образование антител к антигенам неподвижных бактерий.