Дифференциальное окрашивание мицелия

Техника. Готовят смесь Судана 3, хлопчатобумажного синего и йода в молочной кислоте (1:1:1).

Микроскопическая картина. В гифах жир окрашивается в ярко-оранжевый цвет, гликоген – в буро-красный, а прото­плазма – в синий.

Окрашивание амилоидной оболочки

Применяют для большин­ства сумчатых и несовершенных грибов.

Техника. Краси­тель – раствор Люголя. Несколько капель раствора добавляют к готовому препарату на предметное стекло. Время окрашивания от нескольких секунд до 1 часа.

Микроскопическая картина. Амилоидные оболочки окраши­ваются в синий цвет.

Окрашивание клеточной оболочки

Метод Пешкова

Применяют для дрожжей и низших грибов.

Техника. Препарат фикси­руют в жидкости Карнуа и опускают на 2-5 мин в 10-ный рас­твор танина, тщательно промывают и красят фуксином Пфейффера в течение 30-60 секунд, не промывая микроскопируют.

Микроскопическая картина. Оболочки ок­рашиваются в синеватые цвета.

Окрашивание генциановым фиолетовым и конго красным

Применяют для всех видов грибов.

Техника. Препарат фиксируют любым спо­собом, помещают в 0,5-ный водный раствор генцианового фио­летового на 1,5-2 мин, промывают, помещают в 0,5-ный водный раствор конго красного на 2-3 мин, промывают, подсушивают.

Микроскопическая картина. Оболочки окрашиваются в темно-синий или черный цвет

Окрашивание хитиновых веществ

Метод Висселинга

Техника. Препарат кипятят в концентрированной щелочи в течение часа, промывают, нейтрализуют серной кисло­той до получения нейтральной реакции. Затем добавляют две капли раствора йода в йодистом калии и несколько капель раз­веденной серной кислоты.

Микроскопическая картина. Хитин окрашивается в ярко-фиолето­вый цвет.

Определение хитина и хитозана в мицелии

Техника. Отфильтрованный мицелий помещают в аппарат Сосклета для удаления жира эфиром и, если надо, пигмента. Пигмент удаляют спирто-бензолом (1:4) затем отмывают до полного исчезновения спирто-бензола, заливают 4-5-ным едким натром и кипятят в водяной бане 3-4 ч, после чего проверяют на белок биуретовой реакцией.

Для этого к 5-6 мл раствора добавляют такое же количество 10-ного раствора щелочи, хорошо взбалтывают, после чего добавляют 2-3 капли 3-ного раствора сернокислой меди и слабо нагревают; белок окрашивается в фиолетовый цвет.

Если реакция отрицательная, то мицелий отмывают от щелочи до нейтральной реакции и обра­батывают 50-ным едким натром при 140С в течение 1-2 ч. Проверяют наличие хитозана качественной реакцией со слабым раствором йода; хитозан окрашивается в фиолетовый цвет.

Да­лее препарат заливают 1-2-ной уксусной кислотой, в которой хитозан растворяется. После окончательного растворения хито­зана, о чем судят по исчезновению фиолетовой окраски, оста­ется хитин, который окрашивается слабым раствором йода в ин­тенсивный коричневый цвет. Для количественного определения полученный материал заливают абсолютным спиртом на 2-3 ч, высушивают в вакууме при 40С и гидролизуют концентрированной соляной кислотой. Затем определяют количество редуцирующих сахаров (методом Хагедорна-Йенсена).