Флуорохромирование волю­тина корифосфином

Техника. 2 мл основного раствора корифосфина 1:1000 на дистиллированной воде, 6 мл уксусной кислоты, до 50 мл дистиллированной воды. Препарат фиксируют метиловым спиртом 8 с, промывают водой, высушивают. На 10 мин наливают рабочий раствор корифосфина, сливают, вновь промывают водой и высушивают на воздухе.

Микроскопическая картина. Бактерии желто-зеленые, зерна волютина оран­жево-красные.

Окраска по Раскиной

Техника. На препарат наливают краситель, со­стоящий из карболового фуксина Циля – 4 мл, насыщенного рас­твора метиленового синего – 4 мл, ледяной уксусной кислоты – 5 мл, 95% спирта – 95 мл, дистиллированной воды – до 200 мл. Препарат подогревают на пламени до сгорания спирта, а затем промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина. Бактерии окрашиваются в светло-красный цвет, зерна волютина – в черно-синий.

Окраска на грамофильную зернистость Метод Муха

Окраску применяют для выявления зернистой формы ту­беркулезных микобактерий (зерен Муха).

Техника. В смеси 10 мл насыщенного спиртового раствора метилового фиолетового и 100 мл 2% водного раствора карболовой кислоты препарат выдерживают сутки. Затем его 1-2 мин обрабатывают раствором Люголя, 1 мин – 5% раствором азотной кислоты и 10 с – 3% раствором хлористоводородной ки­слоты. После дифференцирования в смеси, состоящей из равных объемов спирта и ацетона, до прекращения отхождения краски промывают водой, докрашивают фуксином Пфейффера, вновь про­мывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина. Микобактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.

Метод Козлова

Метод применяют для выявления зернистой формы ту­беркулезных микобактерий.

Техника. Красят 45 мин в смеси: 1 г генциано­вого фиолетового, 6 г карболовой кислоты, 40 мл глицерина и 100 мл дистиллированной воды. Генциановый фиолетовый и кар­боловую кислоту предварительно растирают в ступке, после чего прибавляют глицерин и дистиллированную воду. Перед употреблением краску разводят 3 частями дистиллированной воды и фильтруют. После промывания препарата водой его 20 секунд обрабатывают раствором Люголя, промывают водой, 2-3 с окра­шивают 0,1% раствором сафранина, вновь промывают водой и су­шат.

Микроскопическая картина. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.

Выявление клеточной стенки бактерий

При обычных методах окраски мазков клеточная стенка не окрашивается, поэтому применяют специальные методы с про­травами.

Метод Пешкова

Техника. Препарат фиксируют 15 мин в жидкости следующего состава: 90% спирта 60 мл, хлороформа 30 мл и уксусной эссенции 10 мл. Протравливают 2-5 мин в 10% водном растворе танина. За­тем препарат промывают водой, красят 30-60 с фуксином Пфейф­фера и, не промывая, сушат и микроскопируют.

Микроскопическая картина. Клеточная стенка окрашивается в розово-красный цвет.

Метод Гутштейна

Техника. Препарат, 1-2 ч фиксированный в жидкости Буэна, 2-3 мин подвергают действию протравы (5-10% водный раствор танина), ополаскивают водой и микроскопируют в капле 0,01% водного раствора кристаллического фиолетового.

Микроскопическая картина. Клеточная стенка приобретает фиолетовый цвет.

Метод Кнази

Техника. Препарат, фиксированный жаром, обрабатывают 3-5 мин протравой, состоящей из 70 мл насыщенного водного раствора калийных квасцов и 30 мл 20% водного раствора танина. На мазок, промытый водой, наносят каплю карболового фуксина, закрывают покровным стеклом и микроскопируют, не удаляя краску.

Микроскопическая картина. Клеточная стенка окрашивается в красно-фиолетовый цвет.

Обнаружение нуклеоида бактерий

Окраска ядерных элементов. Метод Романовского

Техника. Препарат фиксируют метиловым спиртом, спирт-формолом, жидкостью Кар­нуа или смесью Никифорова. Окрашивают рабочим раствором кра­сителя (2 капли красителя Гимза на 1 мл дистиллированной воды) 10-20 мин. Промывают дистиллированной водой и после просушивания микроскопируют. Дистиллированная вода, применяемая для разведения красителя, должна иметь нейтральное значение рН, так как от этого в высокой степени зависят результаты окрашивания. Реакция дистиллированной воды, кроме обычно применяемых с этой целью способов, может быть проверена путем прибавления к ней кристаллика гематок­силина или нескольких капель его спиртового раствора. Вода пригодна, если в течение 2 мин не появляется розовая окра­ска; в противном случае она кислая и должна быть подщелочена 1 % раствором бикарбоната натрия.

Микроскопическая картина. При микроскопировании ядерные элементы имеют красно-фиолетовый цвет, цитоплазма – слабо-розовый.