Вопросы для самоподготовки

1. Основные этапы приготовления микроскопических препара­тов живых клеток (препараты «висячая и раздавленная капли»).

2. Основные этапы приготовления микроскопических препара­тов фиксированных клеток (приготовление мазка, высушивание, способы фиксации)

3. Виды красителей, их классификация.

4. Методы прижизненной окраски микробов.

5. Простые методы окраски.

6. Дифференциально-диагностический метод окраски по Граму.

7. Методы окраски спор, капсул, жгутиков.

8. Методы, используемые для окраски риккетсий, хла­мидий, микоплазм, спирохет, простейших.

9. Методы микроскопического исследования актиномицетов и грибов.

10. Микроскопия вирусов.

Литература

1. Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробио­ло­гия. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 18-50.

2. Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руково­дство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 9-35.

Подготовка предметных и покровных стекол

Предметные и покровные стекла, употребляемые для приго­товления препаратов, должны быть чистыми и хорошо обезжирен­ными. Это может быть достигнуто разными способами. Стекла кипятят 15 мин в 1% растворе соды (или мыльной воде), спо­ласкивают водой, кладут в слабую хлористоводородную кислоту и хорошо промывают водой. Или же сначала выдерживают стекла 2 ч в концентрированной серной кислоте, затем моют их в воде, кипятят в щелочи, вновь промывают водой. Стекла можно также обрабатывать жидкостью следующего состава (по Цетт­нову): Kalii bichromici 20 г, Acidi sulfurici crudi 20 г, воды 200 мл. После 10 мин кипячения в этой смеси стекла про­мывают 5 мин в слабом растворе щелочи, а затем промывают во­дой и, наконец, спиртом. Хранят стекла в сосудах (банках) с притертыми пробками в смеси равных количеств спирта и эфира или в 96% спирте, либо промытыми и вытертыми досуха.

Исследование микроорганизмов в живом состоянии

Исследование микроорганизмов в живом состоянии применя­ется главным образом для изучения формы и подвижности бакте­рий, реже при реакции агглютинации. Для этих целей готовят препараты “раздавленная капля” и “висячая капля” (рис. 5).

Препарат “раздавленная капля”. При приготовлении «раздавленной» капли жидкость с исследуемым материалом наносят на пред­метное стекло и сверху накладывают покровное. Капли мате­риала надо брать такой величины, чтобы они заполняли все пространство между покровным и предметным стеклом и не вы­ступали за края покровного.

Препарат “висячая капля”. Для "висячей" капли необходимо иметь предметное стекло с луночкой. На покровное стекло предварительно наносят каплю жидкости с исследуемой культурой микроорганизмов. Затем на по­кровное стекло накладывают предметное стекло, с луночкой посередине, края которой предварительно смазаны вазелином. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в резуль­тате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат пере­вертывают покровным стеклом кверху. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

Для предотвращения быстрого высыхания препараты рекомендуется помещать во влажную камеру (чашку Петри), на дно которой положено 2-3 влажных кружка фильтровальной бу­маги, покрытых двумя сухими.

При изучении препаратов «раздавленная» и «висячая капля» под световым мик­роскопом край капли сначала отыскивают со слабым увеличением и при суженой диафрагме, а потом исследуют препарат при по­мощи более сильного увеличения. Более удобными для их микроскопического изучения представляются такие виды микроскопии, как темнопольная, фазово-контрастная и аноптральная.