Окраска по Пигаревскому

Техника. Препарат, высушенный на воздухе в течение 10 мин и нефиксированный, окрашивают 1 мин смесью, состоящей из насыщенных растворов метилового зеленого (3,2 мл), пиронина (6 мл), оранжевого (1 мл) и дистиллированной воды (75 мл). После промывания проточной водой дальнейшая окраска, как по Селлеру (см. выше).

Микроскопическая картина. Цито­плазма клеток сиреневого цвета, включения ярко-красные.

Задания к лабораторному занятию

1. Приготовление мазков и окраска культур кокковых и па­лочковидных бактерий простым методом.

2. Окраска смеси бактерий по Граму в модификации Си­нева.

3. Окраска спор Bacillus subtilis по методу Ожешко.

4. Приготовление негативного препарата по Бурри-Гинсу из капсульной культуры Klebsiella pneumoniae.

5. Изучение подвижности Еscherichia coli и Bacillus subtilis методом темнопольной микроскопии в препаратах “раздавленная” и “висячая капля”.

6. Окраска культуры дрожжеподобного гриба Candida albicans метиленовым синим.

7. Микроскопическое исследование плесневых грибов аспер­гилла, пеницилла и мукора в растворе едкого кали и в смеси глицерина со спиртом.

8. Изучение музейных макроколоний патогенных грибов.

9. Изучение демонстрационных препаратов возбудителей про­тозойных инфекций: лейшманиоза, трипаносомоза, лямб­лиоза, трихомониаза, амебиаза. малярии, токсоплазмоза.

10. Изучение риккетсий в демонстрационных препара­тах по Здродовскому.

11. Микроскопическое изучение в демонстрационных пре­паратах элементарных телец Пашена и внутриклеточных включений Гварньери и Бабеша-Негри.

Раздел: “физиология микроорганизмов”

Тема:Питание бактерий. Культивирование бактерий. Искусственные питательные среды.

Цель:Охарактеризовать принципы культивирования бактерий.

Вопросы для самоподготовки

1. Химический состав микробной клетки.

2. Роль минеральных веществ и факторов роста в жизнедеятельности микроорганизмов.

3. Способы питания бактерий.

4. Механизмы питания бактерий.

5. Основные группы питательных сред, их состав и назначение.

6. Требования, предъявления к питательным средствам.

7. Понятие о чистой культуре микроорганизмов и методы выделения.

8. Выделение чистых культур аэробных бактерий (1 этап).

Литература

3. Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробио­ло­гия. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 50-56.

4. Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руково­дство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 36-45.

Питательные средыслужат для выделения из исследуемого материала чистых культур микробов и изучения их свойств.

Питательные среды являются основой бактериологических работ, нередко определяя своим качеством результаты исследования

В состав сред, применяемых для выращивания бактерий, входят необходимые для построения их структуры органогены: азот, углерод, кислород, неорганические соединения, содержащие фосфор, серу, натрий, магний, железо, микроэлементы: кобальт, йод, марганец, бор, медь и др.

Все неорганические элементы должны находится в питательной среде в удобоусвояемом для данного микроорганизма соединениях. Потребность в кислороде и водороде бактерии удовлетворяют за счёт поступающей в клетки воды.

По характеру усвоения азота патогенные микроорганизмы делятся следующим образом: одни из них извлекают его из простых аммонийных соединений, другие нуждаются в аминокислотах, третьи расщепляют высокомолекулярные вещества –пептоны, представляющие собой продукты ферментации белков. Облигатные паразиты размножаются только в присутствии нативного т.е. неизменяемого белка.

Потребность бактерий в неорганических элементах удовлетворяются прибавлением к питательной среде NaCl,KH₂PO₂,K₂HPO₄и т.д. Микроэлементы, выполняющие роль катализаторов химических процессов, поступают в питательную среду с пептоном, неорганическими солями и водой.

Кроме того бактерии нуждаются в ростовых факторах, которые по своей роли соответствуют витаминам для животных. Источником факторов роста, являются прибавляемые к питательной среде продукты растительного и животного происхождения, содержащие в своём составе никотиновую, парабензойную кислоты, витамины А, В, С и др.

Ряд микробов в процессе жизнедеятельности вырабатывают кислоты, сдвигающие РН в кислую сторону, вследствие чего может прекратится их рост. Поэтому к питательным средам добавляют, так называемые, буфер-вещества, сохраняющие установленную реакцию среды (например, фосфорнокислые соли).

Правильный подбор состава среды обеспечивает возможность выделения микроорганизмов из мест их обитания, получения чистых культур, изучения их морфологии и биохимических особенностей, способствует быстрой и правильной диагностике инфекционных заболеваний, дает возможность получить биомассу полезных для народного хозяйства микроорганизмов. Питательные среды не могут быть универсальными для всех видов микробов, так как микроорганизмы обладают индивидуальными особенностями питания и проявляют свои характерные физиологические свойства в определённых условиях обмена. Поэтому на практике пользуются разнообразными питательными средами, применительно к тому или иному виду микробов.