- •Руководство
- •Раздел «морфология микроорганизмов» Тема: Виды микроскопии: назначение и принципы применения
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Светопольная микроскопия. Устройство светопольного микроскопа ипорядок работы с ним
- •Темнопольная микроскопия
- •Фазово-контрастная и аноптральная микроскопия
- •Люминесцентная микроскопия
- •Электронная микроскопия
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Подготовка предметных и покровных стекол
- •Исследование микроорганизмов в живом состоянии
- •Препараты фиксированных окрашенных клеток. Приготовление мазка и фиксация препарата
- •Окраска препаратов
- •Виды красителей
- •Методы окраски
- •Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов
- •Окраска разведенным карболовым фуксином
- •Приготовление и окраска препаратов для люминесцентной микроскопии
- •Сложные или дифференциальные методы окраски микробов Дифференциально-диагностический метод окраски по Граму
- •Видоизменение окраски Грама по а. И. Синеву
- •Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробов
- •Окраска по Цилю-Нильсену
- •Флуорохромирование аурамином
- •Модификация Шеффлера и Фултона
- •Окраска по Биттеру
- •Окраска капсул
- •Метод Бурри-Гинса
- •Способ Михина
- •Метод Леффлера
- •Серебрение по Морозову
- •Метод Грея
- •Окраска по Шенку
- •Метод Петрука
- •Окраска включений в бактериях Окраска метахроматических зерен (волютина)
- •Метод Нейссера
- •Метод Пью
- •Окраска по Мейеру
- •Флуорохромирование волютина корифосфином
- •Окраска по Раскиной
- •Окраска на грамофильную зернистость Метод Муха
- •Метод Козлова
- •Выявление клеточной стенки бактерий
- •Метод Пикарского
- •Окраска риккетсий Метод Романовского-Гимза
- •Метод Здродовского
- •Окраска хламидий
- •Метод Хайденхайна
- •Окраска йодом и йод-эозином
- •Негативная окраска по Бурри
- •Дифференциальное окрашивание мицелия
- •Окрашивание ядерного аппарата Метод Фельгена
- •Трехцветное окрашивание по Флеммингу
- •Окрашивание гематоксилином Делафильда
- •Окрашивание гематоксилином и эозином (или эритрозином)
- •Микроскопия вирусов
- •Окраска препаратов Окраска по Романовскому
- •Окраска по Муромцеву
- •Окраска по Морозову
- •Окраска по Селлеру
- •Окраска по Пигаревскому
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: “физиология микроорганизмов”
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Требования, предъявляемые к питательным средам
- •Выделение чистых культур микроорганизмов.
- •Методы выделения чистых культур аэробных микроорганизмов.
- •Методы, основанные на принципах механического разделения микроорганизмов
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах
- •Пигменты микроорганизмов
- •Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах
- •Второй этап выделения чистой культуры
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Сахаролитические ферменты микробов
- •Протеолитические ферменты микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Третий этап выделения чистой культуры.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Методы культивирования анаэробных микроорганизмов
- •Физические методы
- •Химический метод
- •Биологический метод
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Методы санитарно-микробиологического анализа воды.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Стерилизация. Методы стерилизации.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: ”химиотерапия инфекционных заболеваний ”.
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Питательные среды для определения чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом “бумажных дисков”
- •Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде
- •Метод двукратных серийных разведений в плотной питательной среде
- •Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в жидких средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в плотных средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к нитрофурановым препаратам методом разведений в жидких средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к энтеросептолу методом разведений в жидких средах
- •Ускоренные методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: "фитопатогенные микроорганизмы. Методы микробиологического контроля лекарственного сырья и готовых лекарственных средств
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Определение микробиологической чистоты лекарственного сырья и готовых лекарственных средств, не обладающих антимикробными свойствами
- •Подготовка образцов для анализа
- •Питательные среды
- •Определение общего числа бактерий
- •Определение количества плесневых и дрожжевых грибов
- •Определение присутствия бактерий семейства Enterobacteriaceae
- •Определение присутствия s. Aureus и p.Aeruginosa
- •Определение микробиологической частоты нестерильных лекарственных средств, обладающих антимикробным действием
- •Количественное определение бактерий и грибов
- •Количественное определение бактерий сем. Enterobacteriaceae (e.Coli)
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки.
- •Литература
- •Определение стерильности лекарственных средств, субстанций, вспомогательных веществ методом прямого посева
- •Определение стерильности лекарственных средств, субстанций и вспомогательных веществ методом мембранной фильтрации
- •Задания к лабораторному занятию
- •Определение стерильности лекарственного средства
- •Раздел: « инфекция и иммунитет»
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Экспериментальная инфекция
- •Выбор и подготовка к заражению лабораторных животных
- •Методы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие зараженных лабораторных животных
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Основы иммунодиагностики
- •Сбор иммунологического анамнеза и характеристика основных иммунопатологических синдромов
- •Диагностические тесты, проводимые непосредственно у больного (тесты in vivo)
- •Основные тесты лабораторной иммунодиагностики
- •Методы исследования лимфоцитов
- •Методы, основанные на изучении поверхностных маркеров
- •Исследование функционального состояния лимфоцитов
- •Реакция бласттрансформации лимфоцитов (рбтл)
- •Оценка интенсивности продукции цитокинов
- •Оценка гиперчувствительности замедленного типа
- •Оценка функционального состояния фагоцитов
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Реакции антиген-антитело. Химические основы
- •Определение аффинности антител
- •Основные методы выявления антител и антигенов
- •Методы, основанные на реакции преципитации
- •Двойная радиальная иммунодиффузия
- •Иммуноэлектрофорез
- •Электроиммунный анализ
- •Встречный электрофорез
- •Методы, основанные на реакции агглютинации
- •Реакция непрямой агглютинации (гемагглютинации) (рнга)
- •Реакция торможения непрямой гемагглютинации (ртнга)
- •Методы, основанные на использовании меченых реагентов
- •Радиоиммунологические методы
- •Метод иммунного окрашивания после переноса на нитроцеллюлозные мембраны (иммуноблоттинг)
- •Иммуноферментные методы
- •Иммунофлуоресцентные методы
- •Применение двойной флуоресцентной метки
- •Реакция лизиса
- •Реакция связывания комплемента
- •Реакция нейтрализации
- •Феномен иммуноклеточного прилипания
- •Задания к лабораторному занятию.
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Общая характеристика, основы производства и применения бактерийных и вирусных препаратов.
- •Этапы создания искусственной вакцины
- •Аспекты gmp
- •Персонал
- •Помещения и оборудование
- •Помещения для животных и уход за ними
- •Документация
- •Производство Исходные материалы
- •Партии посевного материала и система банков клеток
- •Принципы работы
- •Контроль качества
- •Методы и условия введения препаратов
- •Методика введения гетерогенных (из крови животных) сывороток и иммуноглобулинов с предварительной внутрикожной пробой.
- •Реактогенность бактерийных и вирусных препаратов
- •Общая характеристика реактогенности
- •Оценка и учет послепрививочных реакций
- •Основные клинические формы поствакцинальных осложнении
- •Иммуномодулирующие препараты
- •Иммуностимулирующие препараты
- •Нестероидные противовоспалительные препараты (нпвп)
- •Иммунодепрессанты
- •Задания к лабораторному занятию
- •Министерство здравоохранения Украины Национальная фармацевтическая академия Украины Кафедра микробиологии
- •1 Мл содержит 1 млрд микробных тел
- •Иммунизация мышей антигеном.
Задания к лабораторному занятию
Определить микробное число почвы.
Определить коли-индекс и коли-титр воды методом титрации.
Провести санитарно-бактериологический анализ воздуха методом седиментации.
Тема: Микрофлора организма человека
Цель: Изучение методов исследования нормальной микрофлоры организма.
Вопросы для самоподготовки
Общая характеристика микробиоценозов человека.
Нормальная микрофлора кожи.
Нормальная микрофлора полости рта.
Микрофлора верхних дыхательных путей.
Нормальная микрофлора пищеварительного тракта.
Нормальная микрофлора мочевыводящих путей.
Нормальная микрофлора половых органов.
Микрофлора коньюктивы глаза.
Роль аутофлоры в жизнедеятельности организма человека.
Литература
Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробиология. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 150-159.
Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 72-74.
Сложившиеся в процессе эволюции микробные биоценозы тела человека поддерживают его нормальное функционирование. Важную роль играет нормальная микрофлора тела человека в формировании естественного иммунитета макроорганизма, так как его постоянная микрофлора обладает выраженными антагонистическими свойствами относительно многих возбудителей инфекционных заболеваний. Причиной высокой антагонистической активности нормальной микрофлоры человека является выделение этими микроорганизмами бактериоцинов, антибиотиков, молочной кислоты, спиртов, жирных кислот, перекиси водорода и других веществ, подавляющих рост и размножение патогенных видов. Нарушение экологических взаимоотношений между биоценозами и организмом человека, а также изменения в самих биоценозах приводят к развитию дисбактериоза.
Дисбактериоз – это качественное и количественное нарушение экологического баланса между микробными популяциями в составе микрофлоры организма человека. Причиной дисбактериозов может служить резкое снижение иммунитета при хронических инфекциях, воздействии радиации, нерациональное использование антибиотиков широкого спектра действия (тетрациклины, левомицетин и т. д.).
При дисбактериозах возрастает количество гнилостных микробов из родов Pseudomonads, Proteus; дрожжеподобных грибов Candida albicans; количество E.coli, Klebsiella, Str. faecalis.
Для изучения качественного состава нормальной микрофлоры организма человека используют микроскопию мазков, приготовленных из зубного налета, смывов со слизистой оболочки зева, носа, половых органов и т. д.; а также бактериологические методы исследования.
Бактериоскопические методы:
Обнаружение микроорганизмов зубного налета осуществляют с помощью стерильных палочек, при этом берут его с зубов, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют в иммерсионной системе.
Для обнаружения подвижных микроорганизмов готовят препараты «раздавленная капля», микроскопируют их в темнопольном или фазово-контрастном микроскопе.
При бактериологическом исследовании делают смывы с лица, рук, слизистых носа тампоном, смоченным в физиологическом растворе. Затем взятый таким образом материал высевают на чашки Петри с МПА, кровяным или сахарным агаром. Инкубируют при 37оС в течение 24 часов. С помощью отдельного тампона, помещенного в пробирку с глюкозо-пептонной средой для обнаружения бактерий группы кишечных палочек берут смывы с рук с последующим высевом на среду Эндо или розоловый агар, дальнейшее выделение кишечной палочки, аналогично стандартной методике обнаружения бактерий группы кишечных палочек.
Кроме того можно использовать метод посева отпечатков пальцев на чашках с МПА, прикасаясь к поверхности питательной среды. О качественном составе микрофлоры рук судят через 24 часа экспозиции при 37 оС. Делают мазки из отдельных колоний, окрашивают по Граму. В мазках можно обнаружить стафилококки, дрожжи, грамположительные и грамотрицательные палочки.
Количественное бактериологическое исследование смывов с рук также проводят с целью проверки соблюдения правил личной гигиены работниками аптечных учреждений. Смывы с рук получают путем тщательного протирания ладоней межпальцевых и подногтевых пространств влажным тампоном. Тампон помещают в пробирку, добавляют 8 мл стерильной воды, в которой тампон тщательно прополаскивают. Из исходных смывов в зависимости от предполагаемой степени бактериальной загрязненности готовят ряд десятикратных разведений. Смывы исследуют на общие бактериальные загрязнения (микробное число) по методике, описанной при определении микробного числа воды, на наличие бактерий группы кишечных палочек, золотистого стафилококка. Для определения бактерий группы кишечных палочек в пробирку с тампоном после взятия смыва наливают 5 мл среды Кесслера (1 л воды, 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 10 г лактозы, 4 мл 1% р-ра генциана фиолетового – состав среды Кесслера). Затем пробирки термостатируют в течение 24 часов при 43 оС. При наличии роста производят высев на дифференциально-диагностическую среду Эндо. Рост на среде типичных красных колоний указывает на наличие в смывах кишечной палочки. Заканчивается исследование постановкой оксидазной пробы.
Для обнаружения золотистого стафилококка смыв в количестве 3-4 капель засевают на чашки Петри с желточно-солевым агаром. После инкубирования в течение 24 часов при температуре 37 оС изучают свойства выделенных культур стафилококка.
Результаты бактериологического исследования смывов с рук можно оформить в виде таблицы.
Таблица 1
Исследуемый материал |
Разведение и объем посевов |
Количество колоний |
Результаты |
Смывы с рук |
|
|
|