Методы окраски

ПРИЖИЗНЕННАЯ (ВИТАЛЬНАЯ) ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ

Окрашивание живых микроорганизмов позволяет изучить характер и степень их подвижности. Применение этих методов ограничивается слабой восприимчивостью живых клеток к анилиновым красителям и нестойкой окраской препаратов. Следует также учесть, что при таких методах окра­ски микробы сохраняют жизнеспособность, и препараты могут яв­ляться инфекционным материалом.

Окраска метиленовым синим

Техника. Чистое предметное стекло смачивают кипящим насыщенным водным раствором метиленового синего. Когда краска на стекле высохнет, его протирают сухой тряпочкой до нежно-голубой окраски. На подготовленное таким образом стекло наносят каплю исследуемой культуры, покрывают покров­ным стеклом и микроскопируют.

Микроскопическая картина. Микробы постепенно окрашива­ются в бледно-голубоватый цвет.

Окраска нейтральным красным

Приготовление красителя: насыщенный на хо­лоду водный раствор нейтральрота разводят физиологическим раствором хлористого натрия 1:100.

Техника. Каплю исследуемого материала смешивают на предметном стекле с каплей разведенного нейтральрота. Препарат покрывают по­кровным стеклом и микроскопируют с иммерсией.

Микроскопическая картина. Микробы постепенно окрашива­ются в розоватый цвет.

Негативный способ окраски живых бактерий

Для окраски используют тушь, негрозин, конго крас­ный. Тушь чертежную разводят дистиллированной водой в соот­ношении 1:10. Конго красный используют в виде 3% водного раствора.

Метод Бурри

Техника. Каплю исследуемой культуры смешивают на пред­метном стекле с каплей туши, затем с помощью другого стекла, поставленного к первому под углом в 45, делают тон­кий мазок по принципу приготовления мазков из крови. Мазок высушивают на воздухе и микроскопируют нефиксированным.

При использовании раствора конго рот после высушива­ния мазок обрабатывают 1% раствором соляной кислоты в аб­солютном алкоголе, затем высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина: на окрашенном фоне ясно видны неокрашенные светлые микробные клетки.

Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов

В микробиологической работе наиболее употребительны способы окраски фиксированных микроскопических препаратов, кото­рые в основном можно разделить на две группы: ориентировоч­ные, или простые, и дифференциальные, выявляющие химические и структурные особенности того или иного вида микроорганизма.

Простые методы окраски микробов

Простые методы окраски препаратов предполагают использование одного анилинового красителя и позволяют изучить такие морфологические признаки микроорганизма, как форму, размеры, расположение в мазке. Для этих целей используется ряд красителей: метилено­вый синий, фуксин и др.

Окраска спиртово-водным раствором метиленового синего

Приготовление раствора: красителя 1 г, 95% спирта 10 мл, дистиллированной воды 100 мл.

Техника. Нанести на фиксированный мазок на 3-5 минут.

Микроскопическая картина. Все клетки окрашиваются в синий цвет.

Окраска водным раствором метиленового синего

Приготовление раствора: красителя 1 г, дистиллированной воды 1000 мл.

Техника. Нанести на фиксированный мазок на 5-10 минут.

Микроскопическая картина. Окраска дает нежные отчетливые препа­раты клеток, окрашенных в синий цвет.

Окраска щелочным метиленовым синим (синим Леф­флера)

Приготовление щелочного раствора метиленового синего: дистиллированной воды 100 мл, 10% раствора едкого калия 2 капли, насыщенного (7%) раствора метиленового синего 30 мл или 2) метиленового синего 3 г, 95% спирта 20 мл, 1 % раствора едкого калия 1 мл, дистилли­рованной воды 100 мл. Это стойкий и хорошо красящий раствор.

Техника. Нанести на фиксированный мазок на 3-10 минут.

Микроскопическая картина. Дает окраску в синий цвет различной интенсивности для разных видов микроорганизмов и тканевых элементов (рис.13).