Метод Петрука

Техника. Метод Петрука – модификация метода Грея. Вме­сто карболового фуксина применяют нитрат серебра, раствор которого готовят следующим образом: 1 г АgNОз растворяют в 2 мл дистиллированной воды, к нему по каплям добавляют 5% рас­твор аммиака до растворения образовавшегося осадка и появле­ния легкой опалесценции. Этот исходный раствор разбавляют в 10 раз дистиллированной водой и применяют для окраски. Пре­парат с нанесенным на него раствором нитрата серебра слегка подогревают над пламенем.

Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в желто-коричневый цвет.

Окраска включений в бактериях Окраска метахроматических зерен (волютина)

Волютин является запасным полифосфатом у некоторых видов бактерий, Его наличие и расположение в клетке может иметь диагностический характер, например, у коринебактерий дифтерии (тельца Бабеша-Эрнста).

Метод Нейссера

Способ 1.

Приготовление краски Нейссера: а) метиленового синего 0,1 г, 95% спирта 2 мл, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл; б) раствор хризоидина, или везувина, или бисмаркабраун красителя 1 г, дистиллированной воды 300 мл. Краситель растворяют в кипящей воде и фильтруют через бу­магу.

Техника. Препараты выдерживают по 1 минуте в растворе метиленового синего и в растворе Люголя. Промывают водой. Докрашивают раствором хризоидина (или везувина, или бисмаркбраун) 1-3 мин. Промывают водой.

Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в светло-желтый цвет, зерна Бабеша-Эрнста – в темно-синий.

Способ 2.

Приготовление растворов. Готовят ос­новные растворы:

Раствор 1:

• Метиленового синего – 0,1 г

• Этилового спирта 95 – 2 мл

• Ледяной уксусной кислоты – 5 мл

• Дистиллированной воды – 100 мл

Раствор 2:

• Кристаллвиолета – 1 г

• Этилового спирта 95 – 10 мл

• Дистиллированной воды – 300 мл

Для окраски смешивают две части раствора 1 с одной ча­стью раствора 2.

Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов 1 и 2, через минуту краску сливают и мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем про­мывают водой, докрашивают в течение 2-3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в светло-желтый цвет, зерна волютина (Бабеша-Эрнста) – в темно-синий (рис.19).

Метод Пью

Техника. К 2 мл этилового спирта добавляют 0,2 г то­луидинового синего, а затем 100 мл 5% раствора уксусной ки­слоты (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл воды). На фик­сированный мазок наливают краску и нагревают 1-2 минуты, до появления паров. Дают остыть, смывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: тела палочек – синего цвета, метахроматические зерна – красновато-фиолетовые.

Окраска по Мейеру

Техника. Одновременно из исследуемых бактерий готовят два одинаковых препарата и фиксируют жаром или в те­чение 5-15 мин в жидкости Карнуа. Красят оба мазка 10 мин метиленовым синим Леффлера и затем один из них помещают в 1% водный раствор серной кислоты, другой – в 4% водный раствор карбоната калия. Через 5 мин препараты сушат фильтровальной бумагой (не промывать). Препарат, обработанный кислотой, до­крашивают 0,25% раствором светлого зеленого (лихтгрюн) с 2-3 каплями крепкой уксусной кислоты или хризоидином.

Микроскопическая картина. Бактерии окрашиваются в зеленый или коричневый цвет, зерна волютина – в вишнево-красный. В препарате, обработанном щелочью, волю­тин обесцвечен – пустоты на фоне слабо окрашенных бактерий.