Окрашивание гематоксилином Делафильда

Техника. Препарат фикси­руют 35-50-ным спиртом и помещают в краситель, для изготов­ления которого 1 г гематоксилина растворяют в 6 мл абсолют­ного спирта и этот раствор вливают по каплям в 100 мл насы­щенного водного раствора аммонийных квасцов и оставляют сто­ять в течение недели, затем прибавляют по 25 мл глицерина и метилового спирта и фильтруют через 4 ч. Время окрашивания 3-30 мин. Препарат промывают в нескольких сменах воды 5-30 мин. Для дифференциации структур клетки к воде или спирту добавляют соляную кислоту (1 капля на 100 мл воды); После чего промывают 70-ным спиртом и водой.

Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в красный цвет, протоплазма в фиолетовый.

Окрашивание гематоксилином и эозином (или эритрозином)

Техника. Препарат окрашивают гематоксилином Делафильда и дифференци­руют подкисленным спиртом. Срезы объекта погружают в 1-ный спиртовой раствор эозина (или эритрозина) на 1-2 мин, прово­дят через крепкие спирты, промывают как обычно.

Микроскопическая картина. Ядро и клет­чатка окрашиваются в пурпурный цвет, протоплазма – в розо­вый. Особенно хорошо окрашиваются ржавчинные грибы.

Окрашивание борным кармином

Применяется при изучении ядер, хромосом и т.д.

Техника. В 100 мл воды, нагретой до 50С, рас­творяют 4 г буры, добавляют 3 г кармина, а потом доливают 100 мл 70-ного спирта и фильтруют. Препарат фиксируют любым способом, промывают, обезвоживают до 50 проводкой через спирты, погружают в краситель на 1-3 дня, промывают 70-ным спиртом, подкисленным 1-2 каплями соляной кислоты, 2-3 дня.

Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в яркий розовый цвет.

Окрашивание ацетокармином

Техника. Нефиксированный препарат по­мещают в краситель, приготовленный следующим образом: насы­щают кармином 45-ный (по объему) раствор уксусной кислоты при температуре кипения; после остывания, отстаивания и фильтрации на каждые 100 мл раствора прибавляют 1-2 капли 1-5-ного раствора уксуснокислого железа. Время окрашивания – 1-24 ч.

Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в яркий розовый цвет.

Окрашивание пирокармином

Техника. Препарат фиксируют спиртом, промывают водой и помещают в краситель, приготовленный сле­дующим образом: 1 г кармина растворяют в 50 мл воды с 50 мл крепкого аммиака, добавляют 50 мл насыщенного раствора пик­риновой кислоты и оставляют в растворе красителя на 2-3 дня, затем фильтруют.

Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в яркий розовый цвет.

Окрашивание методом HCl-Гимза

Особенно хорошо окрашива­ются ядра в гифах несовершенных грибов.

Техника. Препарат фиксируют метиловым спиртом, смесью спирта с формалином или жидкостью Карнуа по следующей схеме: Фиксация жидкости Карнуа 10 мин; промывка в 96-ном спирте; выдерживание в 70-ном спирте 30 мин; промывка в дистиллированной воде; выдерживание в холод­ной соляной кислоте 6 мин; гидролиз 4-6 мин при 60С; про­мывка в холодной 1 н. соляной кислоте и дистиллированной воде; выдерживание 15 мин в буферном растворе (фосфатный бу­фер, pH 6,9), затем 30-40 мин в растворе Гимза (исходный раствор и буфер (1:1) готовят непосредственно перед употреб­лением).

Приготовление раствора Гимза: 3,8 г азурэозина раство­ряют в 125 мл глицерина при 60С, добавляют 395 мл метилового спирта и фильтруют.

Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в синий цвет. При мик­роскопировании препарат помещают в глицерин.