- •Руководство
- •Раздел «морфология микроорганизмов» Тема: Виды микроскопии: назначение и принципы применения
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Светопольная микроскопия. Устройство светопольного микроскопа ипорядок работы с ним
- •Темнопольная микроскопия
- •Фазово-контрастная и аноптральная микроскопия
- •Люминесцентная микроскопия
- •Электронная микроскопия
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Подготовка предметных и покровных стекол
- •Исследование микроорганизмов в живом состоянии
- •Препараты фиксированных окрашенных клеток. Приготовление мазка и фиксация препарата
- •Окраска препаратов
- •Виды красителей
- •Методы окраски
- •Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов
- •Окраска разведенным карболовым фуксином
- •Приготовление и окраска препаратов для люминесцентной микроскопии
- •Сложные или дифференциальные методы окраски микробов Дифференциально-диагностический метод окраски по Граму
- •Видоизменение окраски Грама по а. И. Синеву
- •Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробов
- •Окраска по Цилю-Нильсену
- •Флуорохромирование аурамином
- •Модификация Шеффлера и Фултона
- •Окраска по Биттеру
- •Окраска капсул
- •Метод Бурри-Гинса
- •Способ Михина
- •Метод Леффлера
- •Серебрение по Морозову
- •Метод Грея
- •Окраска по Шенку
- •Метод Петрука
- •Окраска включений в бактериях Окраска метахроматических зерен (волютина)
- •Метод Нейссера
- •Метод Пью
- •Окраска по Мейеру
- •Флуорохромирование волютина корифосфином
- •Окраска по Раскиной
- •Окраска на грамофильную зернистость Метод Муха
- •Метод Козлова
- •Выявление клеточной стенки бактерий
- •Метод Пикарского
- •Окраска риккетсий Метод Романовского-Гимза
- •Метод Здродовского
- •Окраска хламидий
- •Метод Хайденхайна
- •Окраска йодом и йод-эозином
- •Негативная окраска по Бурри
- •Дифференциальное окрашивание мицелия
- •Окрашивание ядерного аппарата Метод Фельгена
- •Трехцветное окрашивание по Флеммингу
- •Окрашивание гематоксилином Делафильда
- •Окрашивание гематоксилином и эозином (или эритрозином)
- •Микроскопия вирусов
- •Окраска препаратов Окраска по Романовскому
- •Окраска по Муромцеву
- •Окраска по Морозову
- •Окраска по Селлеру
- •Окраска по Пигаревскому
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: “физиология микроорганизмов”
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Требования, предъявляемые к питательным средам
- •Выделение чистых культур микроорганизмов.
- •Методы выделения чистых культур аэробных микроорганизмов.
- •Методы, основанные на принципах механического разделения микроорганизмов
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах
- •Пигменты микроорганизмов
- •Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах
- •Второй этап выделения чистой культуры
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Сахаролитические ферменты микробов
- •Протеолитические ферменты микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Третий этап выделения чистой культуры.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Методы культивирования анаэробных микроорганизмов
- •Физические методы
- •Химический метод
- •Биологический метод
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Методы санитарно-микробиологического анализа воды.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Стерилизация. Методы стерилизации.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: ”химиотерапия инфекционных заболеваний ”.
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Питательные среды для определения чувствительности микробов к антибактериальным химиопрепаратам
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом “бумажных дисков”
- •Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде
- •Метод двукратных серийных разведений в плотной питательной среде
- •Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в жидких средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в плотных средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к нитрофурановым препаратам методом разведений в жидких средах
- •Определение чувствительности микроорганизмов к энтеросептолу методом разведений в жидких средах
- •Ускоренные методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.
- •Задания к лабораторному занятию
- •Раздел: "фитопатогенные микроорганизмы. Методы микробиологического контроля лекарственного сырья и готовых лекарственных средств
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Определение микробиологической чистоты лекарственного сырья и готовых лекарственных средств, не обладающих антимикробными свойствами
- •Подготовка образцов для анализа
- •Питательные среды
- •Определение общего числа бактерий
- •Определение количества плесневых и дрожжевых грибов
- •Определение присутствия бактерий семейства Enterobacteriaceae
- •Определение присутствия s. Aureus и p.Aeruginosa
- •Определение микробиологической частоты нестерильных лекарственных средств, обладающих антимикробным действием
- •Количественное определение бактерий и грибов
- •Количественное определение бактерий сем. Enterobacteriaceae (e.Coli)
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки.
- •Литература
- •Определение стерильности лекарственных средств, субстанций, вспомогательных веществ методом прямого посева
- •Определение стерильности лекарственных средств, субстанций и вспомогательных веществ методом мембранной фильтрации
- •Задания к лабораторному занятию
- •Определение стерильности лекарственного средства
- •Раздел: « инфекция и иммунитет»
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Экспериментальная инфекция
- •Выбор и подготовка к заражению лабораторных животных
- •Методы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие зараженных лабораторных животных
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Основы иммунодиагностики
- •Сбор иммунологического анамнеза и характеристика основных иммунопатологических синдромов
- •Диагностические тесты, проводимые непосредственно у больного (тесты in vivo)
- •Основные тесты лабораторной иммунодиагностики
- •Методы исследования лимфоцитов
- •Методы, основанные на изучении поверхностных маркеров
- •Исследование функционального состояния лимфоцитов
- •Реакция бласттрансформации лимфоцитов (рбтл)
- •Оценка интенсивности продукции цитокинов
- •Оценка гиперчувствительности замедленного типа
- •Оценка функционального состояния фагоцитов
- •Задания к лабораторному занятию
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Реакции антиген-антитело. Химические основы
- •Определение аффинности антител
- •Основные методы выявления антител и антигенов
- •Методы, основанные на реакции преципитации
- •Двойная радиальная иммунодиффузия
- •Иммуноэлектрофорез
- •Электроиммунный анализ
- •Встречный электрофорез
- •Методы, основанные на реакции агглютинации
- •Реакция непрямой агглютинации (гемагглютинации) (рнга)
- •Реакция торможения непрямой гемагглютинации (ртнга)
- •Методы, основанные на использовании меченых реагентов
- •Радиоиммунологические методы
- •Метод иммунного окрашивания после переноса на нитроцеллюлозные мембраны (иммуноблоттинг)
- •Иммуноферментные методы
- •Иммунофлуоресцентные методы
- •Применение двойной флуоресцентной метки
- •Реакция лизиса
- •Реакция связывания комплемента
- •Реакция нейтрализации
- •Феномен иммуноклеточного прилипания
- •Задания к лабораторному занятию.
- •Вопросы для самоподготовки
- •Литература
- •Общая характеристика, основы производства и применения бактерийных и вирусных препаратов.
- •Этапы создания искусственной вакцины
- •Аспекты gmp
- •Персонал
- •Помещения и оборудование
- •Помещения для животных и уход за ними
- •Документация
- •Производство Исходные материалы
- •Партии посевного материала и система банков клеток
- •Принципы работы
- •Контроль качества
- •Методы и условия введения препаратов
- •Методика введения гетерогенных (из крови животных) сывороток и иммуноглобулинов с предварительной внутрикожной пробой.
- •Реактогенность бактерийных и вирусных препаратов
- •Общая характеристика реактогенности
- •Оценка и учет послепрививочных реакций
- •Основные клинические формы поствакцинальных осложнении
- •Иммуномодулирующие препараты
- •Иммуностимулирующие препараты
- •Нестероидные противовоспалительные препараты (нпвп)
- •Иммунодепрессанты
- •Задания к лабораторному занятию
- •Министерство здравоохранения Украины Национальная фармацевтическая академия Украины Кафедра микробиологии
- •1 Мл содержит 1 млрд микробных тел
- •Иммунизация мышей антигеном.
Метод Хайденхайна
Техника.
Реактивы. 1) Жидкость Шаудина: делают смесь 1 объема 96 этилового спирта с 2 объемами насыщенного раствора сулемы; к этой смеси непосредственно перед употреблением приливают ледяную уксусную кислоту в количестве 3-5% к общему объему. Смесь употребляют слегка нагретой (до появления паров). 2)Спирт этиловый 70-96. 3) Спирт-йод – 70 этиловый спирт, к которому добавлена настойка йода до красноватого цвета. 4) Железо-аммониевые квасцы, 2,5-4% водный раствор. 5) Раствор гематоксилина: 1 г кристаллического гематоксилина растворяют в 10 мл 96 этилового спирта и доливают до 100 мл дистиллированной водой: настаивают на свету при комнатной температуре 2-3 недели.
Жидкость Шаудина наносят на нефиксированный мазок на 2-5 минут. Затем мазок помещают в 70 этиловый спирт на 2 минуты, смесь этилового спирта с йодом на 2 минуты и снова в этиловый спирт на 2 минуты. Мазок промывают дистиллированной водой в течение 2 минут и помещают в раствор железо-аммониевых квасцов на сутки. Через сутки мазки быстро ополаскивают дистиллированной водой, дают стечь воде и переносят в раствор гематоксилина на сутки. После этого мазки промывают водопроводной водой в течение 5 минут и далее дифференцируют 2% раствором квасцов.
Дифференцирование является наиболее трудным моментом. Его цель – удаление излишка краски для выявления структуры простейших. Оно проводится под контролем микроскопа. С препарата осторожно удаляют осадок краски и наливают раствор квасцов. Дифференцирование прекращают, когда протоплазма отдаст излишек краски, и появятся четкие контуры клеток. После этого препарат промывают проточной водой и подсушивают.
Микроскопическая картина. На серо-лиловом фоне цитоплазмы клеток отчетливо видны черные хроматиновые элементы ядер.
Окраска йодом и йод-эозином
Используется для окраски нативных мазков амеб и их цист.
Техника. Для приготовления мазка используют раствор Люголя, приготовленный следующим образом: в 100 мл дистиллированной воды сначала растворяют 2 г йодистого калия, а затем 1 г кристаллического йода. Жидкость хранят в склянке темного стекла.
Йод-эозин (по Дональдсону): смешивают равные объемы насыщенного раствора кристаллического йода в 5% водном растворе йодистого калия и насыщенного водного раствора желтого (водорастворимого) эозина.
Микроскопическая картина. Цисты и вегетативные клетки приобретают четкие контуры коричневого оттенка.
Негативная окраска по Бурри
Используется для выявления амеб и их цист.
Техника. См. выше.
Микроскопическая картина. На темно-сером тушевом фоне видны бесцветные клетки и цисты (рис.24).
Микроскопическое исследование актиномицетов
Простые методы окраски (см. выше)
Техника. См. выше.
Микроскопическая картина. Клетки приобретают цвет примененного красителя (рис.25).
Метод Грама
Техника. См. выше.
Микроскопическая картина. Клетки окрашиваются грамположительно (в сине-фиолетовый цвет).
Микроскопическое исследование патогенных грибов
Исследуемый материал помещают на предметное стекло в каплю 10-20% едкой щелочи (или смеси спирта с глицерином), закрывают покровным стеклом и исследуют сразу после приготовления и через 20 минут (рис.26).
Основные красители
Наиболее часто применяемые в микологической практике красители для контрастного окрашивания мицелия – метиленовый синий, метиловый фиолетовый, генциановый фиолетовый, раствор Люголя.
Метиленовый синий применяют в виде спиртовых, водных, щелочных растворов: 1) спиртовый раствор: к 100 мл 96-ного спирта добавляют 3 г краски, взбалтывают, оставляют отстояться на несколько суток, фильтруют; перед употреблением разводят в 5-10 раз; раствор прочный; 2) водный раствор: к 100 мл воды добавляют 2 г краски, отстаивают 2 суток; периодически взбалтывают.
Окраска метиленовым синим
Техника. На зафиксированный мазок наносят водно-спиртовый раствор метиленового синего на 5-10 мин.
Микроскопическая картина. Клетки окрашиваются в синий цвет (рис.27)