Модификация Шеффлера и Фултона

Техника. На препарат, фиксированный жаром, наносят на 30-60 секунд 5% водный раствор малахитового зеленого и нагревают до появле­ния паров 3-4 раза. Мазок промывают и докрашивают 0,5% водным раствором сафранина в течение 30 секунд. Промывают водой, высушивают через фильтровальную бу­магу.

Микроскопическая картина. Споры зеленые, а вегетативные клетки красные.

Окраска по Биттеру

Техника. Нефиксированный мазок, обработан­ный 10% раствором формалина (10 мин), промытый водой и вы­сушенный, красят аммиачным метиленовым синим (20 мл насы­щенного спиртового раствора метиленового синего, 3 мл креп­кого раствора NH₄0H и 80 мл дистиллированной воды) 3 минуты, нагревая стекло до закипания жидкости. После промывания во­дой и высушивания докрашивают мазок везувином или сафрани­ном 3-5 мин. Вновь промывают, высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина. В мазке бактерийные тела красные или буро-желтые (в зависимости от краски, примененной для докрашивания), споры синие.

Окраска капсул

Окраска капсул микробов может иногда иметь диагностиче­ское значение. Бактериальные капсулы представляют собой слизистый слой, состоящий из разбухших в воде в виде геля полисахаридов или полипептидов.

В мазках из органов или из тканей капсулы можно обнаружить при помощи простой окраски щелочным или другими растворами метиленового синего. Однако специальные окраски дают более четкие препараты.

Для их выявления в мазке можно использовать негативные методы окраски, при которых окрашивают фон препарата и клетки, окруженные бесцветными капсулами.

Метод Бурри-Гинса

Техника. На середину предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и микроскопируют. На чер­ном фоне видны неокрашенные микробы, капсулы.

Мазок, окрашенный тушью по Бурри, фиксируют сулемой, ме­тиловым спиртом или на пламени. После промывания водой кра­сят 5-10 мин карболовым раствором тионина или фуксина и вновь промывают, а затем высушивают.

Микроскопическая картина. Бактерии фиолетовые или крас­ные. Фон черный. Капсулы неокрашенные (рис.17).

Способ Михина

Техника. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 2-3 минут при подогревании (до появления паров). Затем краску быстро смывают водой и мазок высушивают фильтровальной бумагой.

Микроскопическая картина. Капсулы – светло-розовые, бактерии – темно-синие.

Способ Ольта

Техника. Мазок окрашивают 2-3 % водным раствором сафранина в течение 1-3 минут с последующим быстрым смыва­нием водой. Раствор сафранина готовят перед употреблением, растворяя краску в горячей воде с последующим фильтрованием. На мазок наносят каплю воды, накрывают покровным стеклом, а на него помещают каплю иммерсионной жидкости.

Микроскопическая картина: капсулы – бледно-желтого, а бактерии – коричневого цвета.

Способ Кауфмана

Техника. Мазок окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 2-3 минут. Краску смывают водой и мазок погру­жают в 0,25% водный раствор протаргола или 0,5% раствор азотнокислого серебра на 3-4 минуты, затем окрашивают кар­боловым раствором фуксина, разведенным 1:20, в течение 5-10 секунд, промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: капсулы – темно-красные, бак­терии – темно-синие.

Способ Ребигера

Техника. Препарат фиксируют формалином, причем фикса­ция происходит одновременно с окраской. Для этого гото­вят раствор: 15-20 г генцианвиолета растворяют в 100 мл 40% формалина; дают раствору постоять несколько часов и фильт­руют. Окрашивают нефиксированный мазок указанным раствором в течение 15-20 секунд, быстро промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: капсулы – красновато-фио­летовые, бактерии – темно-фиолетовые.

Способ Ионе

Техника. Фиксированный мазок окрашивают 2% водным рас­твором метилвиолета (или генцианвиолета) в течение 1-2 минут при подогревании. Краску быстро смывают небольшим ко­личеством воды, мазок в течение 10 секунд обрабатывают 2% раствором уксусной кислоты, промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: капсулы – розовато-фиолето­вые, бактерии – темно-фиолетовые.

Окраска по Антони

Техника. Мазок красят (без фиксации!) на хо­лоду 1% водным раствором кристаллического фиолетового 2 мин. Затем промывают 20% водным раствором серной кислоты и высу­шивают фильтровальной бумагой.

Микроскопическая картина. Бактерии окрашиваются в темно-синий цвет, капсулы – в сине-фиолетовый.

Окраска по Гиссу

Техника. Препарат, фиксированный любым спосо­бом, кроме жара, красят 5% водным раствором генцианового фиолетового, подогревая до появления паров. Мазок промывают 20% водным раствором медного купороса и сушат.

Микроскопическая картина. Бактерии и капсулы окрашиваются в фиолетовый цвет различной интенсивности.

Окраска жгутиков

Это одна из наиболее трудных процедур в бактериологиче­ской технике, так как жгутики очень легко повреждаются при приготовлении препарата. Поэтому здесь требуется особая тща­тельность работы. Стекла для препаратов должны быть абсо­лютно чисты и обезжирены. Обычно работают с новыми покров­ными стеклами, которые предварительно кипятят в течение 10 мин в хромовой смеси (двухромовокислого калия 20 г, воды 200 мл, серной кислоты 20 мл; приливать в указанном порядке). После кипячения стекол хромовую смесь сливают, промывают стекла 5 мин в слабом растворе едкого натра, после чего обильно промывают водой, ополаскивают спиртом и хранят в спирте (во время промывания не касаться стекол руками). Пе­ред употреблением стекла вынимают из спирта чистым пинцетом и удаляют спирт обжиганием (ничем не вытирать!).

Исследуемая культура должна быть не старше 12-18 ч. Ма­териал берут осторожным прикосновением петли к культуре и вносят в пробирку с несколькими миллилитрами водопроводной воды, погружая петлю в воду и держа ее неподвижно некоторое время. Повторяют это 2-3 раза, пока не получится тонкая, лишь слегка опалесцирующая взвесь. Полученной взвеси дают постоять 15-20 мин в термостате для равномерного распределе­ния микробов в воде. Затем платиновой петлей переносят каплю на покровное стекло. Если стекло достаточно чисто, капля принимает правильную круглую форму, легко расплывается и бы­стро высыхает на воздухе без подогревания. Препараты фикси­руют на огне и окрашивают специальными способами, причем пе­ред окраской обрабатывают протравой, которая усиливает дей­ствие краски.