Препараты фиксированных окрашенных клеток. Приготовление мазка и фиксация препарата

Исследование бактерий в окрашенном препарате дает воз­можность не только изучить их морфологию, но и получить представление о некоторых деталях их химического строения. Это достигается применением специальных методов.

Техника приготовления препаратов. В зависимости от характера исследуемого материала при его заборе используют бактериологическую петлю, пастеровскую пипетку или иглу. Петлю делают из платиновой или нихромовой нити длиной 5-6 см, закрепляют в петледержателе или впаивают в стеклянную палочку. Конец проволоки сгибают в виде плотно замкнутой петли размером 1x1,5 или 2x3 мм. Петлю держат как карандаш. Рабочую часть петли прожигают в пламени горелки в вертикальном положении, сначала конец петли, затем постепенно всю металлическую часть. Обезжиренное предметное стекло прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой микроорганизмов держат между указательным и большим пальцами левой руки. Бактериологическую петлю берут правой рукой и прожигают ее в пламени горелки. Не выпуская петли из правой руки, мизинцем прижимают пробку к ладони и вынимают из пробирки. Во время манипуляции с пробиркой пробка находится в руке. Прожигают пробку и горло пробирки в пламени горелки. Вводят петлю в пробирку. Охлаждают петлю о стенку пробирки, чтобы горячая петля не убила выросшую культуру. Захватывают петлей культуру и выводят ее из пробирки, не касаясь стенок. Держа петлю с культурой, закрывают пробирку пробкой над пламенем горелки. Ставят пробирку в штатив. Из жидких культур ка­плю материала наносят на предметное стекло бактериальной петлей и равномерно распределяют по центру предметного стекла. Из культуры микроорганизмов на плотной среде бактериальной петлей делают забор микробной массы и размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле водопроводной воды. Остатки культуры на петле, сжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым и небольшим. Мазок высушивают на воздухе при комнатной температуре.

Приготовление мазка из гноя или мокроты

Материал забирают стерильной пипеткой или петлей и нанося на середину предметного стекла. Затем вторым предметным стеклом покрывают первое так, чтобы остались свободными треть первого и второго стекол. Стекла раздвигают в стороны и получают два отдельных больших мазка.

Приготовление мазков из крови

Каплю крови наносят на границу между левой и средней третью предметного стекла. Затем краем второго специально отшлифованного стекла прикасаются к капле крови, располагая стекло под углом в 45°. Прижимая отшлифованное стекло к предметному, продвигают его. Хорошо сделанный мазок имеет желтоватый цвет и просвечивает.

Приготовление мазков-отпечатков из внутренних органов трупов и пищевых продуктов твердой консистенции

Раскаленным скальпелем прижигают поверхность органа или пищевого продукта и из этого участка вырезают кусочек материала. Разрезанной поверхностью прикасаются к стеклу в 2-3 местах.

Фиксация мазка

После полного высыхания мазки фиксируют, чем достигается умерщв­ление микробов и прочное прикрепление их к стеклу. Фиксация резко улучшает окрашиваемость микро­бов, которые в живом виде слабо воспринимают краски. Самый простой и рас­пространенный способ – фиксация жаром. Держа стекло мазком вверх, его трижды проводят через пламя газовой или спиртовой горелки (мазком вверх). Во избежание перегрева препарата время фиксации не должно превышать 5-6 с, а время прямого воздействия пламени – 2 с. Кроме жара, для фиксации могут быть применены следую­щие вещества:

1. Этиловый 95% спирт. Время фиксации 10-15 мин.

2. Смесь равных объемов абсолютного спирта и эфира (по Никифорову) – 10-15 мин.

3. Метиловый спирт – 5 мин.

4. Ацетон – 5 мин.

5. 1% раствор сулемы – 10-15 мин и затем промывание пре­парата раствором NaCI и водой.

6. 10% раствор AgNO₃ – 10 мин.

7. Жидкость Буэна: формалина неразбавленного 10 мл, ле­дяной уксусной кислоты 2 мл и насыщенного водного раствора пикриновой кислоты 30 мл.

8. Жидкость Карнуа: ледяной уксусной кислоты 10 мл, хло­роформа 30 мл и 96% спирта 60 мл.