Химический метод

Метод Аристовского

Материал, исследуемый на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно которого кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфит натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда устанав­ливают на подставке чашки с посевами. Прибор помещают в термостат при темпе­ратуре 37 °С на 24-48 часов.

Биологический метод

В почве, воде, человеческом и животном организме анаэробы постоянно встречают­ся с аэробами. При этом аэробы, поглощая необходимый для их жизни кислород, создают условия, благоприятствующие развитию анаэробных микроорганизмов. Тот же принцип лежит в основе биологических методов культивирования анаэробов в лабораторной обстановке. Для этого используют метод Фортнера. В чашку Петри наливают толстым слоем питательный агар. Когда агар застынет по­средине чашки стерильным скальпелем вырезают бороздку шириной 1-1,5 см. Затем одну половину среды засевают культурой аэроба, а другую - анаэробной культурой. Щель между дном и крышкой чашки промазывают вакуумной смазкой или залива­ют парафином. Затем чашку помещают в термостат. Быстрорастущие аэробы по­глощают находящийся в чашке кислород и создают тем самым благоприятные усло­вия для роста анаэробов.

Задания к лабораторному занятию

1. Учтите биохимическую активность микроорганизмов. Заполните таблицу.

Таблица

Биохимическая активность бактерий

Морфология бакте-рий	Окраска по Граму	Биохимические свойства								Вид культуры
		Сахаролитические ферменты					Протеолитические ферменты
		1	2	3	4	5	1	2	3
		Глюкоза	Лактоза	Сахаро-за	Маль-тоза	Манит	Желатин	Индол	Серо-водород

2. Приготовьте препараты из культуры анаэробов на среде Китта-Тароцци и молоке под маслом.

Приготовление мазков из культуры анаэробов со среды Китта-Тароцци и молока под маслом имеет свои особенности. Пробирку со средой наклоните под углом 30-35 градусов. Возьмите стерильную пастеровскую пипетку, закройте указательным пальцем с тупого конца и отпустите под слой вазелинового масла в нижнюю часть среды, после чего откройте пипетку, сняв с нее палец. Поднявшейся по капилляру жидкости будет достаточно для приготовления мазка. Не меняя наклона пробирки, выведите капилляр из среды. Мазок сделайте обычным способом. Окрасьте по Граму.

3. Приготовление мазков из кислого молока и квашенной капусты проведите обычным способом. Окрасьте по методу Грама. При микроскопии мазков обратите внимание на размер, форму бактерий и их окраску. Изучите, сделайте зарисовки в альбом.

4. Произведите посев почвенной суспензии на среду Китта-Тароцци и молоко под маслом.

Для этого наберите в пастеровскую пипетку 0,2-0,5 мл почвенной суспензии и внесите ее в пробирку со средой Китта-Тароцци (среда накопления), поместите в термостат на 18-24 час при 37ºС. Учтите на следующем занятии изменения, происшедшие в среде, а именно: помутнение, газообразование. Оформите протокол.

Тема: Культивирование вирусов

Цель: ознакомление с методами культивирования вирусов