Метод Пикарского

Техника. Препарат обрабатывают I N рас­твором НС1 7 мин при подогревании до 60С. После про­мывания мазок окрашивают по Романовскому.

Микроскопическая картина. Ядерные эле­менты темно-красные, цитоплазма розовая.

Окраска риккетсий Метод Романовского-Гимза

Окраска по Романовскому-Гимза является одним из ос­новных методов при изучении морфологии риккетсий, хламидий, спиро­хет, простейших, а также при исследовании форменных элементов крови.

Техника. Краситель Романовского-Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Непосредственно перед упот­реблением к 10 мл дистиллированной воды нейтральной реакции прибавляют 10 капель краски и тотчас же наливают на препа­рат, предварительно фиксированный жидким фиксатором, на один час. Затем краску сливают, препарат промывают водой, высуши­вают на воздухе и микроскопируют. Окрашивание происходит бы­стрее (30-40 минут), если препарат с краской поместить в термостат при 37С. К 10 мл дистиллированной воды нейтраль­ной или слабо щелочной реакции непосредственно перед окра­ской препарата прибавляют 10 капель краски и тот час же на­ливают на фиксированный препарат (или погружают препарат в стаканчик с краской). Через 1 час краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют. Если по­местить препарат с краской в термостат при 37º, то окрашива­ние происходит быстрее (30-40 минут).

Результаты окрашивания зависят от свойства воды, поэтому следует проверять ее реакцию.

Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в ро­зово-красный цвет, ядра эукариотических клеток – в красно-фиолетовый, а цитоплазма – в голубой.

Метод Здродовского

Техника. Препарат тонким слоем наносят на стекло, фик­сируют на пламени и окрашивают разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дважды дистиллиро­ванной воды) в течение 5 минут; затем препарат слегка обес­цвечивают погружением на 1-3 секунды в слабую (0,01%) соля­ную кислоту, промывают водой и докрашивают в течение 30 секунд 1% раствором водного метиленового синего. Тонкий мазок фиксируют на пламени горелки. Окраску производят разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дис­тиллированной воды) в течение 5 минут. Окрашенный препарат промывают водой, а затем обесцвечивают в растворе органиче­ской или минеральной кислоты (0,5% лимонная кислота, 0,01% соляная кислота) в течение 2-3 секунд. Затем препарат про­мывают водой и докрашивают 0,5% раствором метиленовой синьки в течение 0,5 минуты.

Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в ру­биново-красный цвет, в то время как клетки хозяина обес­цвечиваются кислотой и дополнительно окрашиваются в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет (рис.20).

Окраска хламидий

Метод Романовского-Гимза

Техника (см. выше).

Микроскопическая картина. На разных стадиях развития способность воспринимать окраску у хламидий меняется:

- “Элементарные тельца” (инфекционные частицы) окрашива­ются краской Гимза в пурпурный цвет.

- “Первоначальные тельца” (неинфекционные частицы) окра­шиваются по Гимза в синий цвет.

- Полностью сформировавшиеся зрелые внутриклеточные включения окрашиваются краской Гимза в пурпурный цвет (рис.21).

Метод Грама

Техника (см. выше).

Микроскопическая картина. Окраска по Граму дает вариа­бельные результаты. Поэтому не имеет диагностического значения.

Окраска водным разбавленным раствором Люголя

Придает внутриклеточным формам хламидий коричневый цвет из-за гликогеноподобной оболочки частиц.

Окраска микоплазм

Метод Романовского-Гимза

Техника (см. выше).

Микроскопическая картина. Исследование нативных препа­ратов не дает результата. Окрашивают препарат из куль­туры после агаровой фиксации: кусочек среды с колонией по­мещают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом с каплей спиртового раствора метиленового синего и азура, за­тем препарат высушивают.

Окраска спирохет

Методы окраски спирохет делятся на две группы: методы позитивной окраски, когда окрашивается сама клетка, и методы негативной окраски, когда окрашивается фон препарата, а спирохета остается бесцветной.

Из методов позитивной окраски наиболее употребителен метод Романовского-Гимза.

Метод Романовского-Гимза

Техника. См. выше. Особенностью техники окрашивания препаратов спирохет является длительность окраски – в течение 12-15 часов.

Микроскопическая картина. Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый, лептоспиры – розово-красный, а боррелии – сине-фиолетовый цвет.

Ускоренная модификация Шерешевского

Техника. 15-20 капель красителя Романовского-Гимза разводят в 10 мл 0,5-1% раствора глицерина в воде, разливают в 4-5 пробирок, каждую из которых последовательно нагревают на пламени горелки. Горячий раствор красителя наливают на препарат на 2 минуты, после чего краситель сливают и препарат заливают свежей порцией горячего раствора из следующей пробирки. Вся окраска занимает 8-10 минут.

Микроскопическая картина. См. метод Романовского-Гимза.

Окраска разведенным фуксином

Используется для окраски боррелий.

Техника.

Реактив: фуксин Циля разводят 1:4 или 1:5. Краситель наносят на фиксированный мазок на 1-2 минуты.

Микроскопическая картина. В мазках крови боррелии окрашиваются в розово- красный цвет, эритроциты – в ярко-красный.

Серебрение по Морозову

Техника. См. выше.

Микроскопическая картина. Спирохеты окрашиваются в буро-черный цвет (рис.22).

Для негативной окраски спирохет используют несколько методов.

Негативный метод Бурри

Техника. См. выше.

Микроскопическая картина. На темно-сером тушевом фоне – бесцветные клетки.

Негативная окраска колларголом

Этот метод отличается простотой, доступностью и хорошей эффективностью.

Техника. На фиксированный мазок наливают на 3 минуты 2% раствор колларгола. После этого препарат ставят в наклонное положение (водой не смывают) и подсушивают.

Микроскопическая картина. На золотисто-оранжевом фоне отчетливо контурируется бесцветная спирохета.

Негативный метод Бурри

Техника. См. выше.

Микроскопическая картина. На темно-сером тушевом фоне – бесцветные клетки.

Окраска простейших

Метод Романовского-Гимза

Техника. См. выше.

Микроскопическая картина. Клеточная цитоплазма окрашивается в голубой цвет, а ядра клеток и жгутики – в красно-фиолетовый цвет (рис.23).

Метод Райта

Техника.

Реактивы. Способ приготовления: 1% раствор щелочного метиленового синего на 0,5% растворе двууглекислого натрия наливают в сосуд таким образом, чтобы высота слоя жидкости не превышала 6 см, и нагревают при 100 С в течение часа. Затем жидкость охлаждают и фильтруют. Охлажденный фильтрат в тонком слое при искусственном освещении должен иметь пурпурно-красный оттенок. К 100 мл фильтрата добавляют 500 мл 0,1% водного раствора эозина. При смешивании обеих жидкостей образуется обильный осадок; последний отфильтровывают и высушивают. Полученный таким образом краситель растворяют в ступке в метиловом спирте в соотношении 0,1:60,0.

На сухой нефиксированный мазок наливают несколько капель красителя. Спустя 1 минуту прибавляют столько же капель дистиллированной воды. Через 2-3 минуты препарат промывают в воде около 0,5 минуты, пока он в тонком слое не приобретет розоватого оттенка.

Микроскопическая картина. Ядра простейших окрашиваются в вишнево-красный цвет, цитоплазма – в голубоватый, жгутики – в красный цвет.