Задания к лабораторному занятию

1. Приготовление убитой стафилококковой аутовакцины (имитационная постановка).

Убитую аутовакцину готовят из штамма возбудителя, выделенного непосредственно от больного. Этапы приготовления:

• Посев стаффилококка в пробирку со скошенным питательным агаром.

• Проверка чистоты выросшей культуры – приготовьте мазок со скошенного МПА, окрасьте по Граму, промикроскопируйте.

• Получение маточной взвеси микробных клеток – смойте культуру 5 мл изотонического раствора хлорида натрия.

• Прогревание бактериальной взвеси на водяной бане: температура прогревания 80ºС, время прогревания 30 минут.

• Контроль на стерильность – высейте на МПА каплю прогретой взвеси бактерий.

• Стандартизация вакцины по оптическому стандарту: 1 мл прогретой микробной взвеси разведите стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, сравнивая ее мутность с мутностью оптического стандарта №10 (1млрд. микробных тел в 1 мл), остальной объем взвеси бактерий разведите, добавляя соответствующее количество изотонического раствора хлорида натрия.

• Упаковка вакцины – разлейте вакцину в ампулы по 1 мл и запаяйте их в пламени газовой горелки.

• Этикетировка вакцины – оформите этикетку вакцины:

Министерство здравоохранения Украины Национальная фармацевтическая академия Украины Кафедра микробиологии

Стафилококковая вакцина (убитая)

1 Мл содержит 1 млрд микробных тел

Дата изготовления……………….

Изготовитель…………………….

Хранить при температуре 2-10ºС

2. Титрование дифтерийной антитоксической сыворотки методом флоккуляции по Рамону.

В результате взаимодействия токсина или анатоксина с антитоксической сывороткой выпадают хлопья флоккулята. Наиболее интенсивная и ранняя («инициальная») флоккуляция происходит в пробирке, где антиген и антитело содержатся в эквивалентных соотношениях. Реакцию ставят в два этапа:

1 – по стандартной сыворотке устанавливают количество Lf (Limes flocculation) в 1 мл токсина. Lf токсина определяется его количеством, которое дает «инициальную» флоккуляцию с международной единицей (МЕ) сыворотки. Установив силу токсина, приступают к определению силы сыворотки.

2 – в ряд пробирок наливают по 2 мл известной силы токсина и испытуемую антитоксическую сыворотку в количестве 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 мл. Пробирки выдерживают в водяной бане при температуре 45ºС в течение 30 минут до проявления «инициальной» флоккуляции (опалесценция, переходящая в помутнение). «Инициальная» флоккуляция проявляется в той пробирке, где количество токсина соответствует количеству международных единиц сыворотки.

Ингредиенты	№ пробирки
	1	2	3	4
Антитоксическая сыворотка, мл	0,1	0,2	0,3	0,4
Токсин, мл	2,0	2,0	2,0	2,0
Результаты

3. Получение антителообразующих гибридом методом слияния В-лимфоцитов селезенки и миеломных клеток мышей.

После иммунизации мышей антигеном антитела вырабатываются главным образом В-лимфоцитами селезенки. В-лимфоциты не могут длительно культивироваться in vitro и после нескольких делений гибнут. Клетки же лимфоидных опухолей костного мозга (плазмоцитом или миелом) обладают способностью бесконечно культивироваться in vitro.

Для того, чтобы получить антителопродуцирующие клетки, синтезирующие моноклональные антитела известной специфичности (к определенному антигену), проводят гибридизацию В-лимфоцитов, выделенных от иммунизированных антигеном животных, и миеломных клеток. Полученные антителопродуцирующие клетки называются гибридомами. Этапы получения антителообразующих гибридом: