Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в жидких средах

Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам затруднено тем, что большинство питательных сред, применяемых для определения лекарственной устойчивости микроорганизмов для этих препаратов не годятся. Эти среды содержат значительные количества метаболитов, которые являются антагонистами сульфаниламидов (РАВА фолиевая кислота и т.п.). Поэтому определение чувствительности микробов к сульфаниламидам производят методом разведений на специальных средах. Для определения чувствительности к сульфаниламидам энтеробактерий рекомендуется среда Биргера и Зац, а бактерий кокковой группы – среда Ланди, которые могут применяться как жидкими, так и агаризованными. В связи с существованием перекрестной устойчивости микроорганизмов к большинству сульфаниламидов при определении чувствительности возбудителей к этим препаратам достаточно проверить чувствительность к одному какому-либо сульфаниламиду – например, норсульфазолу.

Разведения сульфаниламидного препарата готовят путем разведения основного раствора препарата стерильной дистиллированной водой согласно представленной схеме (таблица 1).

Для получения необходимых концентраций препаратов в среде к 100 мл питательной среды, пригодной для исследуемой группы бактерий, добавляют 1 мл соответствующего раствора препарата.

Таблица 1

№ п/п	Указания для приготовления растворов сульфаниламидов	Концентрация препарата в полученном растворе в мкг/мл	Окончательная концентрация препарата в мкг/мл в смеси 1 мл раствора препарата и 100 мл среды
1. 2. 3. 4. 5. 6.	Основной раствор 1 мл р-ра № 1 + 9 мл воды 2 мл р-ра № 2 + 2 мл воды 1 мл р-ра № 2 + 9 мл воды 1 мл р-ра № 4 + 9 мл воды 1 мл р-ра № 5 + 9 мл воды	1000000 100000 50000 10000 1000 100	– 1000 500 100 10 1

После добавления соответствующего раствора препарата среду стерильно разливают по 1 мл в пробирки, после чего в каждую пробирку и контрольную (содержащую среду без сульфаниламида) вносят одинаковое количество взвеси тест-культуры.

После заражения пробирки инкубируют при 37°С в течение 18-24 часов или более в зависимости от появления роста микробов в контроле.

Результаты оцениваются так же, как в методе двукратных серийных разведений в жидкой среде.

При приеме обычных терапевтических доз сульфаниламидов наиболее вероятный максимальный уровень препаратов в крови составляет 10-50 мкг/мл. В соответствии с этим, а также сообразуясь с устойчивостью большинства диких штаммов бактерий, выделенных до введения сульфаниламидов в клиническую практику, следует считать клинически устойчивыми к сульфаниламидам штаммы, растущие при концентрации препарата 10-50 мкг/мл и выше.

Определение чувствительности микроорганизмов к сульфаниламидам методом разведений в плотных средах

Проводится по тому же принципу, что и в методе разведений в жидких средах. В качестве питательных сред используются: Мюллер-Хинтон агар, среды Биргера, Зац, Ланди с добавлением 1,5-2% очищенного агара. Ход определения аналогичен описанному ранее методу двукратных серийных разведений в плотной питательной среде.