изображения путем уменьшения вклада изображений, находящихся выше и ниже фокуса. Примерами являются

Laser Scan (Zeiss), а также SOM и Laser-sharp (Bio-Rad). В SOM изображение строится по точкам с помощью сканирования сфокусированным лазерным лучом. Электронная обработка изображения дает картину, несколько напоминающую сканирующую электронную микроскопию. Прибор может быть настроен так, чтобы удалить несфокусированные изображения, что позволяет значительно лучше различать детали изображения. Для того чтобы удалить несфокусированные детали изображения, в плоскость первичного изображения вводится очень маленькая диафрагма, которая располагается непосредственно перед детектором и, таким образом, оказывается в плоскости, сопряженной с точечной полевой диафрагмой. Н. С. Уайт (N. S. White) установил (личное сообщение), что такая система повышает разрешение микроскопа в 1,4 раза.

Фирмой Bio-Rad совместно с В. Б. Амосом (W. В. Amos) и Дж. Г. Уайтом (J. G. White) из MRC в Кембридже разработано приспособление для установки системы MRC Laser-sharp на тринокулярные насадки многих обычных микроскопов. По-видимому, конфокальная микроскопия может быть с успехом применена для удаления фона рассеянного света при эпифлуоресцентной технике наблюдения. Примерами применения этой техники могут служить наблюдения веретена деления в клетках, слоев мозга и каналов в развивающемся курином эмбрионе, деталей строения эмбрионов нематод в скоплениях яиц. Все это может быть отчетливо видно сквозь окружающие структуры, которые при других методах наблюдения вызывают рассеяние света, мешающее наблюдению. Поскольку количество возбуждающего света при конфокальной микроскопии значительно уменьшается, то повреждение образцов становится не таким серьезным. Кроме того, поскольку изображение может храниться до перенесения на фотопленку, снижается вероятность фотообесцвечивания образца [4].

4. Поле зрения

Маркировка увеличения на объективах и окулярах требует некоторого объяснения. В случае, если линза не дает действительного изображения, как например окуляры микроскопов, она изменяет угол падения лучей света. Это называется угловым увеличением и обычно обозначается символом Х10, нанесенным на окуляры.

Многие, хотя и не все объективы дают реальное изображение. Соотношение размеров изображения с размерами деталей препарата представляет собой линейное (латеральное) увеличение, которое вполне точно передается в виде отношения, например, 100:1. Некоторые объективы имеют такую маркировку, на других приводится более краткое обозначение этого отношения, в данном случае—100. Объективы, скорректированные на бесконечность, не дают реального изображения. Их увеличение является угловым и, таким образом, должно правильно обозначаться как Х100. Однако старые объективы могут иметь такую маркировку и в случае, если они дают реальное изображение.

Новичок может быть ошеломлен увеличением размеров деталей, видимых в микроскопе, однако он не сразу понимает, что его поле зрения очень мало. Так, например, если общее увеличение микроскопа равно Х1000, то в линейных размерах соотношение составляет 1 мм к 1 м, а в единицах площади изображение занимает лишь одну миллионную часть образца. Об этом необходимо помнить, особенно тогда, когда заключения о строении целого основываются на наблюдениях одного образца.

Желательно потратить некоторое время на то, чтобы определить размеры поля зрения при разных окулярах и объективах. Для малых увеличений годится линейка с миллиметровыми делениями, которые можно пересчитать от края до края поля зрения. Для больших увеличений необходимо воспользоваться окулярмикрометром.

Многие фирмы-изготовители выпускают окуляры с широким полем зрения, что указывается на их оправах. Сравните их с обычными и посмотрите, какие они дают преимущества. На многих окулярах помимо увеличения выгравировано другое число, которое является фактором поля зрения. Данное число есть диаметр (в мм) максимального поля зрения, который вычисляется следующим образом. Поле зрения при использовании данного окуляра будет составлять в мм указанное число, деленное на увеличение объектива. Соотношение может также изменяться за счет фактора тубуса, который необходимо учитывать при точных расчетах. Так, например, у окуляров широкого поля зрения с фактором поля зрения, равным 18, при использовании объектива 40: 1 линейные размеры поля зрения составят 0,4мм. Если вы хотите определить свой фактор тубуса, вам необходимо измерить приведенными выше методами фактический размер поля зрения, используя различные

5. Резюме

Итак, препарат, освещаемый цугами световых волн, рассеивает их в различной степени в зависимости от своей структуры. Объектив собирает часть рассеянного света в соответствии со своей апертурой. Рассеянный свет, взаимодействуя со светом, прямо прошедшим через препарат, в результате преломления в линзах дает интерференционную картину, которая является первичным изображением микроскопа.

Наблюдатель считает, что эта картина отражает строение препарата, однако аутентичность их лимитируется рядом факторов. Такими факторами являются аберрации линз и недостаточная разрешающая сила объектива,

19