продолжительность обработки следует подобрать экспериментально. Для определенных типов хромосом может оказаться полезным перед окраской уменьшить продолжительность инкубации в растворе 2 х SSC.
4.3. R-окрашивание
Расположение полос при R-окрашивании противоположно тому, которое получается при G-окрашивании, то есть материал, позитивный при R-окрашивании, оказывается негативным при G-окрашивании. Как основной метод для идентификации хромосом R-окрашивание не получило широкого распространения нигде, кроме Франции, однако по крайней мере в двух случаях оно имеет определенные преимущества. Во-первых, его можно использовать вместе с G-окрашиванием для идентификации точек разрыва хромосом, что с помощью только одного метода окрашивания сделать сложнее. Во-вторых, концевые сегменты хромосом, которые после G-окрашивания обычно выглядят бледными, интенсивно окрашиваются с помощью R-окраски. При использовании последнего метода значительно более отчетливо выделяются концы хромосом, поэтому он более полезен для исследования тех структурных изменений хромосом, которые затрагивают их концевые сегменты. Описываемая ниже методика R-окраски принадлежит Сехестеду [24].
Рис. 9.4 Метафазная пластинка (вверху) и кариотип (внизу) лимфоцита человека, R- окраска. Воспроизводится с разрешения по Bostock, С. J, Sum-пег, А. Т. (1978), The Eukaryotic Chromosome, copyright Elsevier Science Publishers BV.
l. Проинкубируйте препарат хромосом в 1 М NaH2PO4-2H2O (156,01 г/л, незабуференный раствор, рН 4,0— 4,5) в течение10 мин при 88 °С.
2.Быстро промойте стекла деионизованной или водопроводной водой в стаканчике для окрашивания.
3.Окрасьте препарат в течение 10 мин по Гимза (красителем Гарра R66, фирмы BDH, 5%-ный раствор в дистиллированной воде, приготовленный непосредственно перед употреблением).
4.Быстро промойте стекла водопроводной водой в стаканчике для окрашивания.
5.Высушите и заключите препараты.
На рис. 9.4 представлены результаты окрашивания данным методом. По сравнению с G-окраской R-окраска позволяет выявить меньше деталей несмотря на то, что она является по существу комплементарной к G- окраске.
Из-за высокой температуры, которая применяется при окрашивании данным методом, необходимо использовать посуду из полипропилена или другого термостойкого и инертного материала. Как и при других методах дифференциального окрашивания, результаты зависят от возраста препаратов, так что автор метода рекомендует окрашивать стекла через 2 дня после получения хромосомных препаратов. Для того чтобы во время инкубации препаратов при температуре 88 °С избежать образования пузырьков на стеклах, которые приводят к появлению недостаточно обработанных участков хромосом, стекла следует слегка постучать друг о друга или о дно стаканчика.
Увеличение или уменьшение молярности используемого для инкубации раствора фосфата ведет к
198