Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
2 курс / Гистология / Световая_микроскопия_в_биологии_Методы_Лейси_А_ред_.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
23.03.2024
Размер:
17.26 Mб
Скачать

микроскопе, в котором есть автоматическое устройство для контроля экспозиции. Камера SX70 проста в обращении и позволяет получать сравнительно недорого фотомикрографии в лабораториях, не оборудованных для обработки пленок, а также если требуется быстро получить результаты.

8.4.3. Поляроидные слайды

Фирма Polaroid выпускает два вида 35-миллиметровых пленок, которые представляют интерес для фотомикрографии: черно-белую Polapan с чувствительностью 125 ед. ISO и цветную Polachrom с чувствительностью 40 ед ISO. Они выпускаются в стандартных комплектах по 12 или 36 кадров, каждый из которых снабжен упаковкой проявителя, используемого при специальном проявлении Поляроида. После снятия всей пленки с камеры процедура проявления занимает менее 2 мин.

Пленка Polachrom необычна тем, что для нее используется цветное проявление, основанное на образовании дополнительных цветов, при котором изображение формируется из отдельных тонких красных, зеленых и синих полосок, подобно тому как это происходит в цветном телевизоре. Данный процесс неизбежно приводит к большим потерям света при просмотре, поэтому слайды Polachrom трудно оценить на глаз, однако через проектор они смотрятся хорошо. В последнее время создана высококонтрастная пленка Polachrome, которая может оказаться пригодной именно для быстрой фотомикрографии.

Помимо пленок быстрого проявления фирма Polaroid недавно выпустила цветную слайдовую пленку для обычной обработки, известную как Professional Chrome. Она выпускается в виде отдельных листков, каждый из которых имеет свою защитную упаковку, и предназначена для стандартных камер Polaroid, рассчитанных на размер кадра 5X4 дюйма (13X10,5 см), которые имеются во многих лабораториях. Поскольку вся пленка упакована, то не нужно защищать от света каждый кадр, как при работе с обычной плоской пленкой. Более того, поскольку данная пленка взаимозаменяема со стандартной пленкой Поляроид формата 5x4 дюйма, то пробную съемку можно сделать на пленке моментального проявления без какой-либо замены оборудования. Слайды размером 5X4 дюйма достаточно велики, чтобы рассматривать их на столике с подсветкой без увеличения, так что они, по-видимому, найдут применение для изготовления фотомикрографий, используемых при обучении. Такие слайды большого формата являются также отличным промежуточным звеном в изготовлении высококачественных цветных отпечатков.

8.5. Хранение неэкспонированной пленки

Фотопленка может повреждаться влагой, теплом и светом, так что ее следует как можно дольше хранить в заводской упаковке. Если пленка будет храниться несколько месяцев, то ее нужно держать в заводской упаковке в холодильнике или морозильнике при температуре 13 °С или ниже. После того как пленку вынули из холодильника, ей надо дать прогреться до комнатной температуры около 1 ч, перед тем как вскрывать упаковку, иначе пленка может повредиться в результате конденсации на ней влаги.

Хранение при низких температурах полезно для всех пленок, но особенно оно важно для пленок с маркировкой «профессиональные» («Professional»), если вы хотите получить правильный баланс цветов. Цветовой баланс изменяется по мере старения пленок, а профессиональные пленки продаются в тот момент времени, когда они имеют оптимальный цветовой баланс.

9. Фотомакрография

Под термином «фотомакрография» обычно понимают такую фотосъемку, при которой размер изображения на пленке оказывается не меньше истинной величины предмета (масштаб 1:1), но, с другой стороны, не больше минимального увеличения, обычно получаемого в микроскопе (25: 1). Этот метод часто считается трудным, и в большинстве лабораторий нет необходимого оборудования. Для него выпускается небольшой набор необходимых приборов, и в них чаще всего нет сложной автоматики, которая применяется в современных мощных микроскопах.

9.1. Системы получения изображения в фотомакрографии

Помимо использования стандартных фотокамер, снабженных приспособлениями для приближения к объекту, которые не будут здесь рассматриваться, существует три известных метода получения изображений с малым увеличением: стереомикроскоп, специально сконструированный «макроскоп» и специально разработанные фотомакрографические объективы, рассчитанные на работу с камерами, имеющими большие раздвижные мехи. Первый из этих способов наиболее доступен, второй является самым дорогим, а третий сочетает в себе наивысшее качество с наименьшими удобствами при использовании. В редких случаях, когда применяется проходящий свет, может быть достаточно простого фотоувеличения.

9.1.1. Стереомикроскопы для фотомикрографии

Хотя стереомикроскоп является на самом деле полноценным микроскопом и получаемые на нем фотографии было бы правильно называть фотомикрографиями, здесь он будет рассмотрен как прибор, позволяющий получить «макро»-увеличения. Стереомикроскоп имеет перед другими системами то

64

преимущество, что он позволяет исследователю проводить непосредственные визуальные наблюдения и в процессе работы фотографировать по мере необходимости. В прошлом результаты съемки на стереомикроскопах не удовлетворяли микроскопистов, так как качество изображения, достаточное для глаза, оказывалось недостаточным для фотографии. Современные приборы значительно усовершенствованы, они позволяют получать отличные изображения, и большинство фирм выпускают к стереомикроскопам адаптеры для совмещения их со стандартным фотомикрографическим оборудованием, которое позволяет легко использовать 35-миллиметровые зеркальные камеры с одним объективом или фотокамеры больших форматов.

Традиционно стереомикроскоп состоит из двух оптических систем, смонтированных под небольшим углом друг к другу и направленных на одну и ту же точку препарата. Благодаря этому углу и, следовательно, различным условиям наблюдения для двух глаз получаются несколько различающиеся изображения, которые позволяют нашему мозгу восстанавливать глубину изображения. Некоторые адаптеры для стереомикроскопов выпускаются съемными, так что с их помощью можно последовательно получать изображения для левого и правого глаза; близнецовые адаптеры позволяют одновременно получать стереопары. Рассматриваемые через специальные приспособления, такие пары изображений позволяют наиболее отчетливо видеть трехмерную структуру объекта. Эта техника завоевала большую популярность. В результате того, что объект рассматривается в стереомикроскоп через две оптические системы, расположенные под углом друг к другу, возникает некоторая дисторсия, и края изображения могут оказаться слегка не в фокусе. В системах, где оба оптических пути проходят через общий объектив, в каждом из них используется лишь часть апертуры линзы, причем боковая, что с точки зрения оптики несколько хуже, чем использование центра линзы. Некоторые специально разработанные стереомикроскопы имеют третью объективную линзу для оптимизации условий фотографирования; некоторые адаптеры фотокамер имеют в каждом оптическом пути диафрагму для увеличения глубины поля зрения. Все эти факторы следует учитывать при выборе стереомикроскопа для использования в фотографии.

9.1.2. Макроскопы

Эти приборы обычно состоят из системы штативов, осветительного оборудования и фотокамер, специально разработанных для фотомакрографии. В них есть система плавного изменения увеличения и диафрагма для контроля глубины поля зрения. Так, Makroskop фирмы Wild выглядит со своей бинокулярной насадкой совершенно как стереомикроскоп, однако он имеет внизу одиночную систему для получения изображения, как и Tessovar фирмы Zeiss.

Макроскопы имеют большое рабочее расстояние, позволяющее устанавливать освещение и манипулировать с препаратом, но отчасти поэтому их апертура и соответственно разрешающая способность ограниченны. Это не является серьезным недостатком в большинстве случаев, где важнее оказываются их преимущества, однако может сказаться при попытке получения высококачественных снимков, особенно в проходящем свете.

9.1.3. Фотомакрографические объективы

Эти объективы разработаны специально для использования без окуляров. Они проецируют увеличенное изображение на пленку при большом расстоянии от объектива до камеры. Примерами являются Photar фирмы

Leitz, Macro Nikkor фирмы Nikon, Macro Zuiko фирмы Olympus и объективы серии Luminar фирмы Zeiss. Все они дают изображение наивысшего качества. Некоторые из них поставляются как части фотосистем, предназначенных для работы с 35-миллиметровой пленкой, и, таким образом, взаимозаменяемы с объективами фотокамер; другие имеют стандартную резьбу для установки в микроскопе, но не приспособлены для использования в качестве обычных объективов микроскопов.

Когда необходимо получить слайд или негатив с 35-миллиметровой пленки, то лучше всего пользоваться макрообъективом, установленным на выпускаемые той же фирмой мехи или тубус. Для этого необходимы еще штатив и подсветка. В случае использования пленки больших форматов или фотоматериалов Polaroid объективы можно устанавливать на специальную панель в фотокамере с мехами, как, например, в Aristophot фирмы Leitz или Multiphot фирмы Nikon, как описано в разд. 6.5.

Большинство фотомакрографических объективов снабжены диафрагмой, часто прокалиброванной в относительных единицах таким образом, что закрывание на одно деление соответствует двукратному уменьшению потока проходящего света. Так же как и при обычной фотографии с использованием объективов микроскопа, меньшие апертуры дают большую глубину резкости, но меньшее разрешение. В обычных условиях апертуру не следует уменьшать более чем на одно-два деления по сравнению с ее максимальным значением; при использовании меньших апертур будет потеряно основное преимущество данных объективов

— их высокая разрешающая способность.

9.1.4. Фотографические увеличители и фотомакрография

Фотоувеличители в некоторых случаях можно использовать для получения макрографий препаратов в проходящем свете, однако этот способ накладывает некоторые ограничения на размер объекта и получаемое увеличение. Препарат следует вставить в держатель для негативов и по возможности затенить те его части, которые не представляют интереса, что позволит уменьшить общее количество рассеянного света в темной комнате. Изображение можно проецировать на плоскую пленку, которую кладут на столе увеличителя так же,

65