Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
2 курс / Гистология / Световая_микроскопия_в_биологии_Методы_Лейси_А_ред_.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
23.03.2024
Размер:
17.26 Mб
Скачать

впервые предложено французским геологом Делессе [10], который изучал минеральный состав пород с использованием полированных шлифов. Изначально АA определяли с помощью зарисовок наружных контуров необходимой фазы, которые аккуратно вырезали и взвешивали, а затем соотносили их вес с весом всей картинки. Позднее Розивалом [11] было показано, что параметр АA, используемый для определения VV, может быть заменен на другой параметр, называемый долей линейных перехватов (LL). Под перехватом здесь подразумеваются те участки линий сеточки, накладываемой на изображение, которые попадают на интересующие нас профили. Если мы просуммируем длину всех перехватов и разделим ее на суммарную длину всех линий, приходящихся на изображение, то мы получим LL. Оно также равно VV. Метод определения LL проще, чем взвешивание вырезанных кусочков, и в последнее время он оказался очень ценным, так как на нем основана работа многих автоматических анализаторов изображения, определяющих АA и VV. Представления об эквивалентности АA, LL и VV были расширены около 50 лет назад. В то время Глаголев [12] показал, что все эти подсчеты могут быть сведены к подсчету той доли от общего числа точек на тестовой сеточке, накладываемой на изображение, которая приходится на интересующую вас фазу. Такой подсчет доли точек (РР) был затем переоткрыт Чокли [13], и в настоящее время ряд авторов математически доказали правильность равенства:

VV=AA=LL=PP.

Для определения вручную АA и VV лучше всего воспользоваться методом, основанным на подсчете точек, так как он относительно прости позволяет достичь заданной степени точности.

3.1.1. Определение АA в двухфазном препарате

Рекомендуется следующая процедура.

1.Приготовьте пробу и исследуйте ее под микроскопом, используя подходящее увеличение и способ получения контраста.

2.Поместите сетку Вейбеля (рис. 7.7, В) в фокальную плоскость окуляра так, чтобы она, будучи наложена на изображение препарата, выглядела резкой (рис. 7.8).

3.Подсчитайте число точек (в нашем случае — концов отрезков), приходящихся на

а) фон (в примере оно =7); б) первую фазу — А ( = 30); в) вторую фазу — Б ( = 5).

Таким образом, если за основную часть препарата считать А, то РР, так же как VV и АA, составит для данного простого испытания 5/30 = 0,166.

4.Повторите этап 3 для большего числа испытаний (например, девяти), чтобы набрать большее число точек. Для каждого из них следует выбрать в микроскопе другое поле зрения.

5.Подсчитайте по результатам ваших измерений промежуточное значение W.

6.Подсчитайте относительную стандартную ошибку (RSE), параметр, предложенный Халли [14]. Она рассчитывается по формуле

В данном уравнении используется промежуточное значение VV, рассчитанное на этапе 5.

7. Повторяйте отбор проб и подсчеты до тех пор, пока не будет достигнута необходимая степень точности. Этап 6 может быть проиллюстрирован на нашем примере следующим образом. Если RSE должна быть на

5% -ном уровне, то, используя значение VV, равное в нашем примере 0,166, мы получим

n = (корень квадратный(1-0,166)/0,05)2 = (корень квадратный(0,84)/0,05)2 = 336 точек

Однако поскольку на долю Vv приходится лишь 16% всей ткани, то мы должны подсчитать самое меньшее 336/16x100 = 2100 точек, попадающих в ткани на обе фазы, чтобы быть уверенными, что мы определили VV для фазы Б с ошибкой не более 5%. Чем меньше доля, приходящаяся на Vv, тем больше будет величина n для данной RSE. Если бы VV интересующей нас фазы составила около 45%, то тогда для получения той же RSE нам пришлось бы посчитать 500 точек, а для VV, занимающей 85%, необходимо было бы лишь 100 точек.

142