систем совпадали. Поскольку расстояние между окуляром и проецируемым на пленку изображением достаточно велико, то обычные окуляры дают хорошее изображение, и нет необходимости пользоваться специальными фотоокулярами и другими приспособлениями. Размер конечного изображения растет с увеличением расстояния, на которое проецируется изображение, и меха позволяют изменять увеличение. Последнее важно в тех случаях, когда нужно получить окончательное изображение строго определенного размера.

7. Наведение на фокус и определение экспозиции

Каким бы оборудованием для фотомикрографии вы ни пользовались, наиболее важными моментами являются точная фокусировка изображения на пленке и правильная экспозиция. Проблемам фокусирования и экспозиции будут посвящены следующие разделы.

7.1. Наведение на фокус

Существует три метода правильного наведения на фокус. Выбор зависит от того, каким оборудованием вы пользуетесь.

1.Простейший и наиболее прямой способ фокусировки используется в камере с раздвижными мехами, предназначенной для применения пленок широких форматов. Здесь изображение фокусируется на матовый экран, расположенный на месте пленки, который затем заменяется кассетой с пленкой. Экран обычно имеет центральное прозрачное пятно, позволяющее видеть неясное изображение, которое можно сфокусировать с помощью лупы. Если на экране нет прозрачного пятна, то его можно легко сделать, нанеся карандашом на матовую поверхность стекла крест, а затем приклеив на это место с помощью канадского бальзама или аналогичного вещества покровное стекло подходящих размеров.

2.При использовании 35-миллиметровой зеркальной камеры с одним объективом и простейшим адаптером фокусировка осуществляется на экране камеры способом, аналогичным описанному выше. Хотя этого может быть достаточно для простейшей работы, изображение вероятно получится нечетким причем его нельзя будет улучшить с помощью дополнительных приспособлений для фокусировки на матовое стекло, таких как микрорастр или расщепляющий визир. Существенно лучшего результата можно добиться, если камера имеет сменяемые экраны. Тогда следует установить прозрачный экран с центральным перекрестьем, что позволяет видеть значительно более яркое изображение (оно будет полностью размываться, если фокус смещается в другую плоскость). В этом случае, поскольку отсутствует матовое стекло, нужное для определения плоскости, в которой должно быть сфокусировано изображение, необходимо использовать дополнительную лупу, чтобы зафиксировать плоскость фокусировки глаз на скрещенных линиях экрана. Все эти принадлежности часто входят в комплект прямоугольного визира.

3.При третьем способе изображение фокусируется вне камеры, в плоскости, сопряженной с плоскостью конечного изображения. Некоторые специализированные фотомикрографические камеры имеют светоделительную призму, которая направляет изображение в боковой тубус, где установлены матовый экран и фокусирующий телескоп. Часть изображения, попадающая на пленку, обозначена на экране рамкой, а само изображение фокусируется на центральное перекрестье, расположенное пар фокально по отношению к конечному изображению на пленке. В тех случаях, когда фотосистема приспособлена для определенной модели микроскопа, для фокусировки может использоваться обычная бинокулярная насадка, снабженная кадрирующим окуляром с сеткой и перекрестьем. Такая система основана на том, что фотокамера и визуальное изображение выставлены правильно относительно друг друга. Обычно это устанавливается на заводеизготовителе, но в некоторых случаях предлагается делать пользователю.

В тех случаях, когда наведение на фокус осуществляется по прозрачному экрану с перекрестьем или через кадрирующий окуляр, необходимо сначала, расфокусировав изображение микроскопа, чтобы оно не мешало глазам, навести на резкость перекрестье, используя для этого подстройку окуляра или лупы. Затем нужно плавно навести на фокус. В процессе наводки следует слегка покачивать головой из стороны в сторону, так как правильный фокус лучше всего определяется по параллаксу. В момент точной фокусировки изображение и перекрестье перестанут смещаться друг относительно друга. Навести на фокус относительно просто, когда используются объективы большого увеличения с большой апертурой. В случае же использования объектива с малым увеличением следует быть особенно внимательным в тех случаях, когда требуется получить хорошую фотографию, поскольку за счет аккомодации глаза выбранная плоскость может значительно сместиться. В этом случае может помочь установка между глазами и окулярами дополнительного телескопа или пары независимо фокусирующихся бинокуляров, за счет которых уменьшается глубина резкости системы. Меньше трудностей здесь встретится для пожилых людей, у которых способность к аккомодации глаз понижена.

На этой стадии следует получить оптимальное изображение, после чего можно снимать. Поскольку наведение на резкость является критическим условием для получения хорошей фотографии и фокус легко испортить, слегка сдвинув микроскоп или препарат, необходимо наводить на резкость непосредственно перед открыванием фотозатвора.

54

7.2. Определение экспозиции

Фирмы — изготовители пленки указывают на ней номинальную «чувствительность», которую следует вводить в экспонометр системы. Чувствительность означает количество света, называемое «экспозицией», которое должно попасть на пленку для получения наилучших результатов. Различные типы пленки требуют различной экспозиции. Если света было слишком мало, негативы получатся бледными, а отпечатки или слайды

— соответственно очень темными. Экспозиция есть произведение интенсивности света на время, в течение которого он попадает на пленку (время экспозиции). Для данной экспозиции существует обратное соотношение между интенсивностью и временем, так что если свет в два раза более яркий, то время, в течение которого он попадает на пленку, должно быть в два раза меньше и т. д. Когда время экспозиции слишком велико или мало, данное соотношение нарушается («реципрокное несоответствие», см. также разд. 8.3.5), и следует давать экспозицию больше расчетной. Многие фотомикрографические камеры разработаны с учетом этого эффекта.

Экспозиция измеряется светочувствительными приборами, в которых под действием света возникает электрический ток или меняется сопротивление. В большинстве современных 35-миллиметровых зеркальных камер с одним объективом есть экспонометр, который измеряет свет, проходящий через объектив, т. е. он измеряет интенсивность света, падающего на пленку. Аналогичное устройство применяется в специальных фотомикрографических камерах. Результаты выводятся обычно на шкалу или на электронный дисплей в виде рекомендуемого времени экспозиции. Использование этого времени даст правильно экспонированную микрографию. Время экспозиции может быть установлено вручную или контролироваться автоматически.

Экспонометры разработаны для правильного определения экспозиции применительно к «средним» объектам. В тех случаях, когда распределение светлых и темных участков необычное, можно получить неправильную экспозицию. Хорошо окрашенный биологический срез, который заполняет все поле зрения, может быть правильно проэкспонирован без поправок. При таком использовании экспонометра, определяющего интегральную яркость по всему полю зрения, препарат, который не заполняет все поле или окружен светлым фоном, скорее всего будет недоэкспонирован, в то время как изображения, имеющие только светлые участки на темном фоне, например при флуоресцентной или темнопольной микроскопии, будут переэкспонированы. Некоторые 35-миллиметровые зеркальные камеры с одним объективом и фотомикрографические камеры оборудованы приспособлением для измерения яркости в пятне, что позволяет получать результаты для небольшой части изображения.

Если в камере нет собственного экспонометра, то можно применять отдельный экспонометр, такой, как Leitz Microsix или Zeiss Ikophot M. Для того чтобы использовать обычные фотоэкспонометры при съемке на микроскопе, нужны специальные приспособления. С их помощью можно снимать показания над или в плоскости окуляра, в фототубусе или в плоскости пленки в камере большого формата.

Экспонометры следует устанавливать на номинальную чувствительность пленки (разд. 8.1.1). В большинстве систем теперь установлена шкала в единицах ISO (Международная организация стандартов) или ASA (Американская организация стандартов). Другие системы могут быть откалиброваны в альтернативных единицах или их чувствительность следует определять эмпирически. Даже в первых системах установка номинальной чувствительности в соответствии с данными фирмы-изготовителя не всегда приводит к правильной экспозиции. Чтобы выявить оптимальные условия работы оборудования, систему следует откалибровать с учетом типа препарата, контраста, комбинации пленка — проявитель и используемых цветных светофильтров (указания по начальной калибровке приводятся в разд. 11.2 и 11.3).

7.3. Контроль экспозиции

Время экспозиции контролируется встроенным в камеру затвором. В 35-миллиметровой зеркальной камере с одним объективом обычно стоит шторный затвор — шторка, движущаяся поперек кадра непосредственно перед пленкой. В совокупности с перемещением зеркала такой затвор создает при срабатывании определенную вибрацию, которая приводит соответственно к размыванию изображения. В специальных фотокамерах для микроскопов затвор устроен таким образом, чтобы предотвратить передачу вибрации в системе, и уже только по этой причине их следует предпочесть обычным фотокамерам. Контроль за срабатыванием затвора может быть ручным, полуавтоматическим, когда необходимая выдержка указывается на индикаторе при нажатии кнопки, или полностью автоматическим, когда затвор остается открытым до тех пор, пока достаточное количество света не попадет на пленку.

Затвор камеры имеет определенный диапазон рабочих скоростей. Для слабого изображения с некоторым риском получения вибрации или сдвига препарата, а также ошибки, вызванной нереципрокным соотношением, можно применять более длинные выдержки. Для фотографирования слишком ярких изображений, когда экспозиция получается меньше, чем позволяет дать система, следует снижать освещенность. В отличие от объектива фотокамеры микроскоп не имеет диафрагмы, позволяющей снижать яркость изображения, хотя как побочный эффект это может происходить при установке диафрагмы. Вся настройка оптики микроскопа направлена только на получение наивысшего качества изображения, а интенсивность освещения может быть изменена только за счет снижения напряжения на лампе (но это будет влиять на цвета при цветной съемке — разд. 8.3.3) либо введением в ход лучей светофильтров — цветных (разд. 8.2.1) или нейтральных (разд. 8.3.3).

55