2.Установите освещение по Кёлеру, используя типичный, хорошо окрашенный препарат, заключенный в среду, которая не пожелтела в результате хранения.

3.Установите с помощью реостата полный накал лампы.

4.Если ваш микроскоп снабжен галогеновой лампой, то сделайте серию экспозиций, согласно этапу 7 из разд. 11.2, без конверсионных светофильтров. Если у вас имеются поглощающие ультрафиолет светофильтры Wratten 2А, 2В или 2Е, то сделайте еще одну серию снимков с ними. Для работы в цвете, где проявление стандартизовано, достаточно будет пяти экспозиций — одной в соответствии с чувствительностью пленки и по одной с выдержками вдвое и вчетверо более короткими и более длинными. Если вам необходима большая точность, то можно делать промежуточные выдержки. Для обычной лампы накаливания смотрите ниже пункт

7.

5.Результаты съемки могут быть оценены на этой стадии, на этапе 8 ниже, или проводится более тщательная проверка цветового баланса на этапе 6.

6.Повторите этап 4, используя последовательно бледно-синие (82, 82А, 82В) или бледно-желтые

(81,81А,81В) светофильтры. Если у вас была правильно определена экспозиция, то по одному кадру с каждым светофильтром этого ряда будет достаточно.

7.При использовании обычной лампы накаливания с вольфрамовой нитью следует на этапе 4 применить фильтр Wratten 82В в сочетании с одним из поглощающих УФ-свет фильтров, а на этапе 6 следует начать без фильтров, затем попробовать последовательно установить 82, 82А, 82С и комбинации 82С + 82 и 82А + 82С.

8.После проявления тщательно проанализируйте результаты, используя для этого либо световой домик со скорректированным светом, где слайды можно сравнить друг с другом, либо диапроектор.

9.По результатам этапа 4 выберите необходимую чувствительность пленки для последующей работы. Если

увас одинаково хорошо получились два кадра, то следует взять промежуточное значение чувствительности. Если при использовании УФ-поглощающего светофильтра картина на слайде заметно менее синяя, то данный светофильтр следует использовать постоянно.

10.Результаты, полученные на этапах 6 или 7, позволят выбрать фильтры для правильного цветового баланса.

11.Если даже наилучший кадр дает искажение цветов, то рассмотрите слайды через различные компенсационные цветные светофильтры, подбирая их до тех пор, пока вы не получите правильной цветопередачи. Сделайте новую серию снимков с использованием этих компенсирующих светофильтров и вновь оцените результаты.

12.Литература для дальнейшего чтения

Kodak Technical Publications (1977) Closeup Photograhpy and Photomacrography. Eastman Kodak Co., Rochester, New York.

Kodak Technical Publications (1978) Photography Through the Microscope. Eastman Kodak Co., Rochester, New York.

Loveland, R. P. (1970) Photomicrography: A Comprehensive Treatise. Wiley, New York, 2 Volumes. Morton, R. A. (1984) Photography for the Scientist. Academic Press Inc., London, 2nd edition.

Thomson, D. I. and Bradbury, S. (1987) An Introduction to Photomicrography» Royal Microscopical Society Microscopy Handbook No. 13, Oxford University Press, Oxford.

White, W. (1987) Photomacrography: An introduction. Focal Press, Boston.

ИММУНОГИСТОХИМИЯ

Мишель Г. Ормерод и Сусанна Ф. Имре

1. Введение

Иммуногистохимия основана на использовании антител для локализации определенных веществ в срезах тканей. Общий подход состоит в том, что срез ткани инкубируют с меченым .антителом, затем срез отмывают и участок, где произошла реакция с антителом, идентифицируют, визуализируя метку.

В течение многих лет для идентификации определенных компонентов клеток используются разнообразные гистохимические методики. Они, однако, не позволяют достичь той избирательности, которая обеспечивается применением антител, а это именно то свойство, которое дает возможность исследователю точно картировать распределение отдельных веществ в тканях. Помимо использования в качестве инструмента для исследований,

70