Литература

1. Савченко А.А., Сунцова Л.Н. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ человека биолюминесцентным методом // Лаб. дело.-1989.-№ 11.-С.23-25.

2. Савченко А.А. Биолюминесцентное определение активности НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдегидрогеназ лимфоцитов // Лаб. дело. - 1991. - № 11. - С. 22 - 25.

3. Фоменко Е.Ю., Слепов Е.В., Инжеваткин Е.В., Савченко А.А. Биолюминесцентный метод определения концентраций метаболических субстратов и кофакторов в лимфоцитах // Биомедицинская химия.- 2006.- Т.52.- Вып. 5.- С.507-510.

4. Инжеваткин Е.В., Фоменко Е.Ю., Слепов Е.В., Савченко А.А. Метаболические изменения лимфоцитов и опухолевых клеток у мышей с асцитной карциномой Эрлиха в процессе роста опухоли // Известия Российской академии наук. Серия биологическая.-2007.-№ 3. - C.376-380.

Влияние пикногенола на резистентность мембран эритроцитов лактирующих животных при стрессе

Г.К. Ташенова

Институт физиологии человека и животных МОН РК, г. Алматы, Республика Казахстан

Для сохранения здоровья чрезвычайно важен баланс между про- и антиоксидантами [1, 2]. Антиоксиданты защищают клеточные структуры от повреждения свободными радикалами и играют главную роль в сохранении целостности клеток и, в конечном счете, нормальном функционировании всего организма. Растущий интерес представляют растительные полифенолы, оказывающие разнообразные биоло­гические эффекты на клеточные системы как in vitro, так и in vivo [3, 4, 5]. Однако информация об антиоксидантных свойствах отдельных полифенольных соединений малочисленна и спорна.

В этой связи нами были предприняты исследования по изучению состояния мембран эритроцитов при действии психоэмоционального стресса в сочетании с биологически активными веществами у крыс, находящихся на стадии лактопоэза. В качестве БАВ нами был исследован экстракт виноградных косточек (пикногенол), являющийся комплексным препаратом, содержащим более 40 биологически активных компонентов, включая растительные фенолы - процианидин и проантоцианиды и органические кислоты.

Методы исследования. Эксперименты проведены на лактирующих самках белых лабораторных крыс массой 150-200 г. Животные содержались в стандартных условиях вивария, получали корм и воду без ограничения и были разделены на следующие группы: 1-я – интактные лактирующие крысы (контроль), 2-я - лактирующие крысы, подверженные воздействию психоэмоционального стресса, 3-я - лактирующие крысы, получавшие биологически активные вещества. В качестве психоэмоционального воздействия использовалась модель отделения помета от матери за прозрачную перегородку в течение 5 часов ежедневно на протяжении 7 дней. В течение 10 дней до начала стрессорной сессии и на протяжении стресс-воздействия животные получали перорально витамин Е (α-токоферола ацетат, Санкт-Петербург) в дозе 100 мг/кг и экстракт виноградных косточек (пикногенол) (Алматы, Казахстан) 1мл/кг массы тела. Сразу после стрессорного воздействия животных декапитировали под легким эфирным наркозом. Для выделения фракции эритроцитов кровь центрифугировали 10 мин при 1000 g. Плазму и лейкоциты удаляли, а эритроциты дважды промывали средой инкубации, содержащей 150 мМ NaCl, 5 мM Na₂HPO₄ (рН – 7,4). Осмотическую резистентность эритроцитов определяли по степени гемолиза в растворах NaCl различной концентрации (0,35- 0,9 г/100мл) при режиме инкубации 20 мин при 37⁰С. Уровень гемолиза клеток рассчитывали в процентах по отношению к 100% гемолизу, вызванному 0,1 г/100мл раствором Na₂CO₃. Гиперосмотический шок эритроцитов проводили путем инкубации эритроцитов в 4М растворе NaCl в течение 5 мин при 37⁰С. Далее пробы подвергались центрифугированию в течение 10 мин при 1000 g и степень гемолиза определяли по оптической плотности супернатанта [6]. Сахарозное сжатие эритроцитов проводили по методике, основанной на определении степени гемолиза в растворах сахарозы различной концентрации [6]. Полученные результаты статистически обрабатывали с использованием программы Microsoft Excel. С учетом критерия Фишера-Стьюдента зарегистрированные изменения показателей считали достоверными при р≤ 0,05.

Результаты и их обсуждение. Нами были проведены исследования по изучению возможности защиты целостности мембран эритроцитов в результате осмотического гемолиза при действии эмоционального стресса пикногенолом, данные которых отражены на рисунке 1. Наблюдалось достоверное повышение осмотической резистентности эритроцитов при кормлении крыс данных групп пикногенолом.

По оси ординат: величина гемолиза, %;

по оси абсцисс: концентрация NaCl, г/100 мл:

1- 0,35 г/100мл, 4 - 0,5 г/100мл,

2 – 0,4 г/100мл, 5 – 0,9 г/100мл раствора NaCl.

3 – 0,45 г/100мл,

Рис. 1. Осмотическая резистентность мембран эритроцитов лактирующих крыс при сочетанном действии психоэмоционального стресса и БАВ

Так, в гипотонических растворах хлорида натрия гемолиз эритроцитов лактирующих крыс, стрессированных на фоне введения пикногенола, снижался почти в 2 раза по сравнению с животными, подверженных стресс-воздействию.

Снижение величины гемолиза было ниже контрольных показателей. Так, в 0,4-0,45 г/100мл раствора NaCl гемолиз эритроцитов составил 21,4% и 10% у лактирующих животных (контроль 37,9% и 24,7%). Таким образом, защитный эффект пикногенола оказался значительно сильней - на 13,9% и 12% при инкубации эритроцитов в 0,4-0,45 г/100мл раствора NaCl, чем протекторное действие витамина Е.

Гиперосмотический шок эритроцитов в 4 М растворе NaCl в группе стрессированных самок вызывал снижение резистентности эритроцитарных мембран на 16,2 % по сравнению с эритроцитами интактных крыс. Сочетанное действие пикногенола и эмоционального стресса приводило к достоверному снижению выхода гемоглобина из эритроцитов на 8 %, таким образом, повышая резистентные свойства эритроцитов. Эффект токоферола был несколько выше – на 2,7 % (рисунок 2).

По оси ординат: величина гемолиза, %;

по оси абсцисс: группы животных.

Рис. 2. Гиперосмотический шок (4М NaCl) эритроцитов лактирующих крыс контрольной и опытных групп

Гемолиз эритроцитов при их сахарозном сжатии в группах животных, получавших БАВ, был существенно снижен, особенно при инкубации эритроцитов в 0,3-0,5 М растворах сахарозы (рисунок 3). Защита мембран эритроцитов пикногенолом сопоставима с действием витамина Е. Надо отметить, что антиоксидантное воздействие исследуемых препаратов привело к повышению резистентности эритроцитов до уровня, превышающего контрольные значения более чем в 2 раза.

Результаты исследования влияния биологически активных веществ (пикногенола и витамина Е) совместно с действием психоэмоциональных стрессов показали, что данные препараты оказывают корригирующий эффект на структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран, повышая резистентные свойства эритроцитов лактирующих самок. Протекторное действие пикногенола, вероятно, обусловлено его способностью связывать свободные радикалы и уменьшать интенсивность окислительных процессов в организме.

По оси ординат: величина гемолиза, %;

по оси абсцисс: концентрация сахарозы, М.

1 – контроль,

2 – стресс,

3 – стресс + витамин Е,

4 - стресс + пикногенол.

Рис. 3. Гемолиз эритроцитов в условиях гиперосмотического сжатия сахарозой при сочетанном действии эмоционального стресса и БАВ