60.Рутинная и дифференциальная окр. Хромосом.

Дифференциальная окраска хромосом

Существуют различные методы окрашивания хромосом. Наиболее распространенными являются: рутинная или обычная окраска и ряд методов дифференциального окрашивания хромосом: Q, G, C, NOR или Ag-окраска. В свою очередь, методы дифференциального окрашивания делятся на 2 группы: 1) приводящие к образованию сегментов вдоль длины всех хромосом (например Q, G, R); 2) приводящие к окрашиванию специфических хромосомных структур, в результате чего выявляется ограниченное число сегментов (С, T, NOR).

Рутинная окраска хромосом достигается путем простого окрашивания полученных хромосомных препаратов красителем Романовского-Гимзе. Это окрашивание приводит к сплошному окрашиванию хромосом по длине, что не позволяет идентифицировать разные морфологически сходные хромосомы набора. Исторически она использовалась первой, но в наше время она практически не применяется для диагностики конституциональных хромосомных нарушений, однако находит применение при анализе хромосомных аббераций в тестировании факторов среды на мутагенную активность.

Q-окраска. Выявляется на хромосомах в виде чередования ярко- и темно-флюоресцирующих полос с помощью флуоресцентной микроскопии хромосомных препаратов, окрашенных флюорохромами (акрихин дигидрохлорид, акрихин-иприт). Эти красители присоединяются к ДНК путем интеркаляции или с помощью ионных сил. При помощи этой окраски выявляют межиндивидуальную вариабельность отдельных участков хромосом.

G-окраска. Выявляется благодаря предварительной обработке хромосомных перпаратов слабым раствором протеолитического фермента трипсина и последующей окраске красителем Гимза. При этом наблюдается полосатая исчерченность хромосом, где темные полосы – гетерохроматин, светлые – эухроматин.

R-окраска. Отличается противоположностью рисунка G-окраске. Темноокрашенные-эухроматин, светлоокрашенные – гетерохроматин. Существует несколько модификаций метода. Наиболее часто применяются обработка препаратов Ba(OH)2 с подогреванием их при 60 градусах и с последующей отмывки в дистиллированной воде и окрашивают красителем Гимзе.

C-окраска выявляется в виде вариабельных по величине темноокрашенных сегментов конститутивного гетерохроматина в прицентромерных районах хромосом, в то время как эухроматиновые участки хромосом окрашиваются очень бледно. Существуют вариации, но необходимо обрабатывать препаратов щелочью с последующей инкубацией препарата в солевом растворе. Затем окрашивают красителем Гимзе.

NOR-окраска. Применяется для выявления ядрышкообразующих районов, расположенных в коротких плечах 5 пар акроцентрических хромосом.

T-окраска. Применяются для выявления теломерных районов хромосом в коротких и длинных плечах. Включают инкубацию препаратов хромосом при 87 градусах в растворе фосфатного буфера. Затем окрашивают красителем Гимзе.

Цитогенетическая номенклатура хромосом. В 1960 году в Денвере создана первая номенклатура. Хромосомный набор (кариотип): включают 46 хромосом -22 пары аутосом, 1 пара-половые. Хромосомы номеруются от 1 до 23. По положению центромеры хромосомы делят: метацентрические (1,3,19,20), акроцентрические (13, 14, 15, 21, 22), субметацентрические (2, 4-12). Также делят на 7 групп от A до G. Группа А-(1-3) – большие метацентрические хромосомы. Группа В – 4,5 – большие субметацентрические. С – (6-12) – средние субметацентрические. D – 13-15 – большие акроцентрические. E – 16-18 – короткие субметацентрищеские. F – 19,20 – маленькие метацентрические. G – 21,22 – малые акроцентрические. X похожа на C, Y похожа на G. Каждая хромосома характеризуется уникальным сочетанием сегментов. Хромосома имеет длинное плечо-q, короткое плечо-p. Выделяю также области и регионы, она нумеруются арабскими числами от центромерного района к теломерному.

61. синдромы,проявл-ся хромосомной нестабильностью.

Хромосомная нестабильность-это проявление нестабильности генома на клеточном уровне. Их относят к болезням репарации ДНК – т.е. есть дефект генов ферментов репарации. Общие признаки болезни репарации: 1) повышенная склонность к злокачественным новообразованиям. 2) признаки преждевременного старения. 3) неврологические расстройства. 4) иммунодифицитные состояния. 5) ВПР. 6) кожные проявления. 7) умственная отсталость. Делятся на –нестабильность структуры хромосом, нестабильность числа хромосом.

Анемия Фанкони. Микроцефалия, микрогнатия(недоразвитие верхней челюсти), широкая переносица, эпикант, гипоплазия лучевой кости и большого пальца, задержка роста и развития, гиперпигментирование впаховой и подмышечных областях, склонность к лейкозам, крипторхизм (не опущение яичек), гипоплазия нарушений половых органов, уменьшение концентрации Ig A. Цитогенетически это проявляется множественными хромосомными абберациями – разрывы хромосом и хроматидными обменами. В основе: дефект репарации ДНК, дефект эндонуклеаз и белков распознающих сшивки ДНК.

Синдром Луи-Бара (атаксия-телеангиэктазия). Наследуется по аутосомно-рецесивному типу. 1:30000. Признаки: мозжечковая атоксия, телеангиэктазия на конъюктиве, открытых участках тела и слизистых, мышечная атрофия, гипоплазия тимуса, иммунодифицит, склонность к злокачественным новообразованиям. Больные погибают от легочных инфекций. Цитогенетически – повышенный уровень спонтанных хромосомных аббераций и повышенная частота транслокаций 7 и 14 хромосомы, 7p14, 7q35, 14q12, 14q32 – там гены рецепторов Т клеток. В основе: повышенная чувсвительность к ионизирующим излучениям и химическим мутагеном, обусловлен дефектами репаративного синтеза ДНК и нарушением клеточного цикла.

Синдром Блюма. Признаки: пониженная масса тела прирождении, задержка роста, узкое лицо с эритемой в виде бабочки, массивный нос, иммунодифицит, склонность к злокачественным новообразованиям, умственная отсталость не всегда, цитогенетически: повышенный уровень сестринских хроматидных обменов (120-150 на клетку при норме 6-8), увеличение хромосомных разрывов, дицентрики, кольца, хромосомные обмены. Также мутации ДНК-лигазы.

Синдром Вернера. Преждевременное старение. Признаки: преждевременное поседение, облысение, атрофия подкожной жировой клетчатки и мышечной ткани. Склеродермия, катаракта, эндокринная патология (сахарный диабет). Бесплодие, гинекомастия, аменорея, высокий голос, умирают 30-40 лет. Цитогенетически: клеточные клоны с разными хромосомными транслокациями.

Синдром Ниймегена. Задержка роста, микроцефалия, птоз, эпикант, иммунодифицит, кожа с пятнами цвета кофе с молоком, умственная отсталость, предрасположенность к злокачественным новообразованием, гиперчувствительность к ионизирующему излучению. Цитогенетически: повышенная частота хромосомных аномалий, с поражением 7 и 14 хромосомы.

Синдром робертса. Признаки: дефекты верхних и нижних конечностей, часто отсутствуют кости предплечья, голени, расщелина губ и неба, микроцефалия, деформированы ушные раковины, двурогая матка, поликистоз почек, ВПС. Рождаются мертвыми или погибают в неонатальном периоде. Цитогенетически: преждевременное расхождение хроматид в центромерных районах и разрыхлением центромер, увеличение анеуплоидных клеток, повышенная частота образования микроядер.