Глава 3

Лигазная цепная реакция. Основана на зависимой от мишени амплификации с использованием термостабильной ДНК-лигазы.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР была открыта в 1986 году американским биохимиком Кэри Мюллисом. ПЦР поз­воляет выявить в исследуемом материале наличие специфического участка ДНК, характерного для исследуемого организма, и много­кратно размножить его. В основе метода лежит многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК (так назы­ваемая направленная амплификация ДНК). Специфичность мето­да составляет 100%, преимуществом является также быстрота получения результатов.

Серологические реакции

Принцип этих реакций основан на выявлении антигенов с помощью специфических антител — либо поликлональных, по­лученных при иммунизации животных антигенами, либо моно-клональных, полученных с помощью гибридомной технологии. В основе этих методов лежит реакция специфического связывания антиген-антитело. Различия методов заключаются в способах ре­гистрации и учета этой реакции. К основным серологическим ре­акциям относятся:

• реакция связывания комплемента (РСК);

• реакция нейтрализации (РН);

• реакция непрямой геммаглютинации (РНГА);.

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

• радиоиммунный анализ (РИА);

• иммуноферментный анализ (ELISA, ИФА).

В настоящее время классические серологические реакции типа РСК, РН, РПГА в силу их низкой чувствительности, высокой тру­доемкости, малой пригодности к автоматизации отступили на вто­рой план. Все большее распространение получили РИФ и ИФА.

Метод иммунофлюоресценции. Как в прямой, так и в непрямой модификации позволяет выявить возбудителя по содержанию в них антигена с помощью моноклональных антител. Метод быст­рый, простой и недорогой, но оценка результата является субъек­тивной и требует высокого уровня подготовки. Недостаточная чувствительность отмечена у больных с вялотекущей и асимптома-тической инфекцией.

Иммуноферментный метод. Полученный материал обрабаты­вается специальной тест-системой. Метод основан на определении антигена с помощью моноклональных антител.

45

Глава 3

На положительный результат в этих случаях указывает измене­ние окраски пробы, которое измеряется спектрофотометрпческим способом. Данный метод позволяет одновременно проводить иссле­дование большого количества проб и объективно оценивать резуль­таты.

Однако в течение 1-1,5 месяца после излечения происходит слущивание разрушенных клеток, содержащих поверхностный антиген, с которым реагируют моноклональные антитела. Поэто­му в течение этого времени контрольный анализ может быть поло­жительным.

Выделение вирусов

Количество вируса в организме обычно бывает максимальным в первые несколько дней после заражения. К моменту появления первых симптомов у больного нередко бывает уже слишком поздно выделять вирус, вызвавший заражение. У некоторых людей, одна­ко, может наблюдаться длительное выделение вируса. Поэтому це­лесообразно пытаться выделять его у больных с подозрением на вирусную этиологию заболевания. Однако если вирус не найден, то это не исключает вероятности вирусной инфекции.

Выделение вируса у новорожденных с подозрением на врожден­ную инфекцию следует проводить как можно быстрее после рожде­ния, чтобы не спутать случаи с неонатальной инфекцией или инфекцией более позднего детского возраста.

Для правильной диагностики инфекционного процесса очень важно производить правильный забор материала. При подозрении на вирусную инфекцию пораженные органы не всегда являются те­ми участками организма, в которых легче всего выделить вирус. Мазки из носа и мокрота обычно непригодны для выделения виру­са. Моча также в ограниченной степени пригодна для этих целей, однако она является предпочительной пробой при исследовании на цитомегаловирусную инфекцию (ЦМВ). При вирусных заболева­ниях, вызывающих образование везикулярной сыпи, для выделе­ния вируса необходимо брать мазок содержимого везикул.