6.6. Количественное определение креатинина в моче
Креатинин является одним из конечных продуктов азотистого обмена (5% от общего азота мочи). Он образуется в мышечной ткани из креатинфосфата.
Креатинфосфат Креатинин + Фн
В свою очередь креатинфосфат синтезируется из креатина в реакции, катализируемой креатинкиназой (креатинфосфокиназой, КФК) с участием АТФ.
Креатин + АТФ Креатин~Р + АДФ
Эта реакция обратима и образование АТФ в обратной реакции является экстренным механизмом обеспечения энергией для мышечного сокращения.
В норме с мочой выделяется только креатинин. Появление креатина в моче (креатинурия) свидетельствует о заболеваниях печени, почек, сахарном диабете, эндокринных расстройствах (гипертиреоз, аддисонова болезнь, акромегалия и др.), инфекционных заболеваниях. Исключением является появление креатина в моче у подростков и у беременных женщин.
Гиперкреатининурия с одновременной креатинурией имеет место при патологии поперечно-полосатых мышц: миозит, миастения, дистрофия. Гипокреатининурия наблюдается при хроническом нефрите, мышечной атрофии после перенесенных инфекций, в старческом возрасте.
Цель работы
Определить содержание креатинина в суточной моче и сравнить с нормой.
Принцип метода
Метод количественного определения креатинина в моче (по Фолину) основан на цветной реакции с пикриновой кислотой. Интенсивность оранжевой окраски пикрата креатинина, измеряемой на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (540 нм), прямо пропорциональна концентрации креатинина, которую определяют по калибровочному графику.
Выполнение работы
Реактивы, этапы |
Опыт |
Контроль |
NaOH, 10% раствор, мл |
1,0 |
1,0 |
Пикриновая кислота (насыщ. р-р), мл |
1,5 |
1,5 |
H2O дистиллированная, мл |
— |
1,0 |
Моча, мл |
1,0 |
— |
Инкубируют при 20С 5 минут |
||
Доводят дистиллированной водой до метки в мерной колбе на 50 мл |
||
Перемешивают |
||
Фотометрируют опыт и контроль против воды (=540 нм, толщина кюветы 1 см). D540 |
|
|
Dоп – Dк |
|
|
Для построения калибровочного графика используют стандартный раствор дихромата калия (K2Cr2O7).
Опытным путем найдено, что оптическая плотность 0,17 М раствора K2Cr2O7 соответствует оптической плотности продукта, образующегося в результате реакции взаимодействия креатинина (концентрация 2 мг/мл) с пикриновой кислотой в щелочной среде. Поэтому калибровочную кривую легко можно построить, используя дешевый и легко доступный дихромат калия.
Из исходного раствора 0,17 М дихромата калия готовят ряд разведений: в 4 мерные пробирки отбирают соответственно 1, 2, 3 и 5 мл исходного раствора и все пробы доводят водой до конечного объема 5 мл. Определяют оптическую плотность полученных растворов при 540 нм в кювете толщиной 1 см против воды. Из полученных значений оптической плотности калибровочных растворов вычитают Dк, определенную в работе ранее, и на основании полученных результатов строят график зависимости оптической плотности от концентрации креатинина. Для этого на оси абсцисс откладывают количество миллилитров дихромата калия, соответствующие концентрации креатинина (0,4; 0,8; 1,2 и 2 мг/мл, соответственно). На оси ординат – величину оптической плотности (D540 –Dк). Полученную в работе величину (Dоп – Dк) откладывают на графике и находят концентрацию креатинина в моче (С мг/мл). Затем рассчитывают массу креатинина в суточной моче:
m
(креатинина) =
г/сутки
Норма: у мужчин: 1 - 2 г/сутки (8,8 - 17,6 ммоль/сутки)
у женщин: 0,6 – 1,5 г/сутки (5,3 – 13,2 ммоль/сутки)
Выводы
Тестовые задания по теме: «Особенности обмена отдельных аминокислот»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»
Глицин участвует в синтезе пуриновых оснований.
В состав КоА входит β-аланин.
Азот гуанидиновой группы аргинина служит источником образования оксида азота.
Монооксигеназы участвуют в образовании катехоламинов.
Триптофан может служить предшественником образования рибонуклеотида никотиновой кислоты (витамина РР).
Серотонин образуется из серина.
Входит ли глутаминовая кислота в состав глутатиона?
Является ли гомогентизиновая кислота промежуточным продуктом превращения фенилаланина?
Возможно ли превращение гистидина в глутаминовую кислоту?
Является ли креатинфосфат макроэргическим соединением?
Может ли цистеин подвергаться процессу декарбоксилирования?
Возможны ли превращения глицина в серин и треонин?
2) Выбрать один правильный ответ
Молекула глицина не участвует в синтезе:
|
Соединение, которое не образуется из тирозина:
|
3) Установить соответствие Х (цифра) и Y (буква)
Y |
|
|
|
Х + глицин
|
гуанидинацетат + орнитин |
|
|
1. лизин 2. аргинин 3. метионин
|
А. метилтрансфераза Б. глицинамидинотрансфераза В. аланинаминотрансфераза |
||
Тестовые задания по теме: «Регуляция и патология аминокислотного обмена»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»
Фенилкетонурия возникает в результате врожденного нарушения синтеза фенилаланин-4-монооксигеназы.
Моча с запахом кленового сиропа появляется при нарушении обмена разветвленных аминокислот.
Квашиоркор наблюдается у детей при недостатке в пище белков.
Алкаптонурия - врожденный дефект обмена триптофана.
Фенилкетонурию можно выявить по повышенному содержанию фенилаланина в сыворотке крови.
Квашиоркор сопровождается снижением сопротивляемости организма инфекциям.
Сопровождается ли повышение концентрации аминокислот в крови ацидемией?
Достигает ли положительного эффекта при фенилкетонурии исключение из пищи тирозина?
Используются ли ингибиторы моноаминоксидаз при лечении депрессивных состояний?
Связана ли болезнь Хартнупа с нарушением всасывания триптофана?
Вызывает ли недостаток витамина В6 нарушения обмена отдельных аминокислот?
Может ли недостаток метионина привести к жировому перерождению печени?
2) Выбрать один правильный ответ
Фенилпировиноградная олигофрения развивается в результате врожденного отсутствия фермента класса:
|
Альбинизм связан с нарушением обмена:
|
3) Установить соответствие между патологией и АМК, нарушение обмена или всасывания которой в кишечнике имеет место при данной патологии
1.фенилпровиноградная олигофрения 2. болезнь Хартнупа 3. алкаптонурия |
А. фенилаланин Б. тирозин В. триптофан |