4.1. Специфичность действия ферментов распада углеводов: амилазы и сахаразы

Крахмал и сахароза – обычные углеводы пищи. Амилаза и сахараза – ферменты, участвующие в расщеплении этих углеводов. Амилаза слюны расщепляет крахмал до мальтозы и, затем, мальтаза расщепляет последнюю до свободной глюкозы. Сахараза кишечного сока расщепляет сахарозу до глюкозы и фруктозы. Источником ферментов могут быть слюна (для амилазы) и пекарские дрожжи (для сахаразы).

Цель работы

Убедиться в специфичности действия амилазы слюны и сахаразы дрожжей на соответствующие субстраты.

Принцип метода

Следят за расщеплением крахмала и сахарозы по образованию глюкозы, которую определяют пробой Троммера (модификация пробы «медного зеркала» на альдегидную группу). Крахмал и сахароза не содержат способной окисляться альдегидной группы и не дают положительной пробы Троммера при нагревании.

Выполнение работы

Слюну разводят 1:5 и полученный раствор используют как источник амилазы. Получение сахаразы осуществляют следующими образом: 10 г пекарских дрожжей тщательно растирают в ступке, добавляют 15 мл воды, перемешивают, фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Полученный фильтрат используют как источник фермента.

В 4 пробирки по каплям добавляют следующие реактивы:

№№ проб	Крахмал	Сахароза	Амилаза	Сахараза	Окраска в реакции Троммера на наличие глюкозы
1	10 капель	-	5 капель	-
2	10 капель	-	-	5 капель
3	-	10 капель	5 капель	-
4	-	10 капель	-	5 капель

Пробы перемешивают и инкубируют при 40°С в течение 10 мин, а затем проводят реакцию Троммера с содержимым каждой пробирки. Результаты записывают в таблицу.

Проба Троммера на наличие глюкозы

К содержимому исследуемого раствора добавляют равный объем 30% раствора NaOH и 1 каплю 7% раствора CuSO₄ , следя за тем, чтобы капли не растекались по стенкам пробирки до появления в верхнем слое неисчезающей голубой мути вследствие образования гидроксида меди (II) Cu(OH)₂. Затем осторожно, не встряхивая пробирку, нагревают её на горелке. При кипячении выпадает желтый осадок гидроксида меди (I) CuOH или красный осадок Cu₂O. В случае избытка CuSO₄ образуется черный осадок CuO.

Выводы

Тестовые задания по теме: «Химия углеводов. Биоэнергетика клеток»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1. Рибоза является альдопентозой.

2. Мальтоза состоит из остатков глюкозы и фруктозы.

3. Запасной формой углеводов у животных является гликоген.

4. Природные моносахариды относятся к L-ряду.

5. Структура гликогена отличается от структуры крахмала большей разветвленностью полисахаридной цепи.

6. Образование АТФ и НАДФН(Н⁺)характеризует анаболические процессы.

7. Одинаково ли количество молекул АТФ, образующихся при окислении НАДН(Н⁺)и ФАДН₂ в цепи биологического окисления?

8. Различаются ли механизмы синтеза молекулы АТФ при субстратном и окислительном фосфорилировании?

9. Способен ли КоQ (убихинон) присоединять атомы водорода?

10. Возможно ли биологическое окисление без окислительного фосфорилирования?

11. Относится ли цитохром с к гемопротеинам?

12. Образуется ли АТФ при микросомальном окислении субстратов?

2) Выбрать один правильный ответ

Углеводом не является: седогептулаза диоксиацетонфосфат глицериновый альдегид 3-фосфоглицериновая кислота ксилулозо-5-фосфат

Макроэргическое соединение: глюкозо-1-фосфат глюкозо-6-фосфат фосфоенолпируват 2-фосфоглицериновая кислота глицеральдегидфосфат

3) Найти соответствие дисахаридов и продуктов их гидролиза

А. сахароза Б. мальтоза В. лактоза

1. глюкоза и галактоза 2. манноза и глюкоза 3. глюкоза и фруктоза 4. галактоза и фруктоза 5. две молекулы глюкозы