- •Российский университет дружбы народов
- •К практическим занятиям по биохимии
- •Авторский коллектив:
- •Предисловие как пользоваться этим учебным пособием?
- •Список сокращений и условных обозначений
- •Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •1. Общие требования безопасности
- •Классификация химических реактивов в биохимической лаборатории
- •2. Требования безопасности перед началом работ
- •3. Требования безопасности во время работы
- •4. Требование безопасности в аварийных ситуациях
- •5.Требование безопасности по окончании работы
- •Раздел 1: Аминокислоты и простые белки Введение
- •1.1 Проверка знаний по органической химии
- •1.2. Цветные реакции на белки и аминокислоты. Реакции осаждения и денатурации белков а. Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •Б. Реакции осаждения и денатурации белков
- •1.3. Количественное определение белка биуретовым методом. Построение калибровочных кривых
- •1 .4. Диализ белков. Бумажная хроматография аминокислот
- •А. Диализ
- •1.5. Коллоквиум I по теме «Аминокислоты и простые белки»
- •Раздел 2: Сложные белки, нуклеиновые кислоты и ферменты Введение
- •2.1 Действие амилазы на крахмал. Влияние температуры на активность амилазы а. Действие амилазы на крахмал
- •Б. Изучение влияния температуры на скорость ферментативной реакции
- •2.2. Количественное определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови с п-нитрофенилфосфатом
- •2.3. Коллоквиум II по теме: «Сложные белки, нуклеиновые кислоты и ферменты» Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Варианты заданий на компьютерном тестировании
- •Правильные ответы
- •Раздел 3: Витамины, липиды, гормоны Введение
- •3.1. Количественное определение витаминов с и р.
- •3.3. Влияние гормонов на содержание глюкозы в крови
- •3.4. Коллоквиум III по теме «Витамины, липиды, гормоны»
- •Раздел 4: Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов Введение
- •4.1. Специфичность действия ферментов распада углеводов: амилазы и сахаразы
- •4.2. Количественное определение глюкозы. Построение «сахарных кривых»
- •4.3. Определение активности сукцинатдегидрогеназы в мышцах. Количественное определение пирувата в моче
- •4.4 Коллоквиум IV по теме: «Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов»
- •Правильные ответы
- •Раздел 5: Обмен липидов и его регуляция Введение
- •5.1. Кинетика действия липазы.
- •5.2. Количественное определение фосфатидилхолинов (лецитинов) по фосфору
- •I. Приготовление рабочего раствора сыворотки.
- •II. Определение концентрации фосфатидолхолинов по содержанию фосфора.
- •5.3. Количественное определение холестерина в сыворотке крови
- •5.4. Количественное определение малонового диальдегида
- •5.5. Коллоквиум по теме «Обмен липидов»
- •Раздел 6: Переваривание белков и обмен аминокислот
- •6.1. Количественный анализ желудочного сока. Определение свободной, связанной, общей соляной кислоты и общей кислотности желудочного сока.
- •6.2. Количественное определение аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
- •6.3. Доказательство проявления активности аланин-аминотрансферазы (АлАт) методом бумажной хроматографии
- •6.4. Экспресс-метод определения повышенного содержания фенилаланина в плазме крови
- •6.5. Количественное определение мочевины в моче ферментативным уреазным/фенол-гипохлоритным методом
- •6.6. Количественное определение креатинина в моче
- •6.7. Коллоквиум по теме: «Обмен простых белков» Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Правильные ответы
- •Раздел 7: Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков. Введение
- •7.1. Определение общего билирубина в сыворотке крови
- •7.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче
- •7.3. А. Определение активности -амилазы в моче
- •7.3. Б. Составные части мочи в норме и при патологии
- •7.4. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови
- •7.5. Определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови
- •7.6. Коллоквиум по теме: «Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белка». Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Правильные ответы
- •Раздел 8: Подготовка к экзамену
- •8.1. Основные вопросы, выносимые на обсуждение
- •8.2. Пример экзаменационного тестового задания по курсу биохимии
- •59. Найти соответствие между процессом и его графическим изображением
- •60. Цикл мочевинообразования установил
- •Ответы к экзаменационному тесту
- •Раздел 9: Приложения
- •9.1. Термины, различающиеся по смыслу, но сходные по написанию и звучанию
- •9.2. Стандартные биохимические наборы и реактивы, используемые в практикуме
- •9.3. Рекомендуемая литература
- •Содержание
- •Раздел 7: Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков. 126
- •Раздел 8: Подготовка к экзамену 148
- •Раздел 9: Приложения 161
II. Определение концентрации фосфатидолхолинов по содержанию фосфора.
К содержимому мерной пробирки после нейтрализации добавляют 2,5 мл молибдата аммония и 0,5 мл 1% р-ра аскорбиновой кислоты, доводят водой до 10 мл. Пробу оставляют на 20 мин при комнатной температуре для развития окраски, а затем проводят измерение оптической плотности на ФЭК в кювете (1 см) при 670 нм. Схема определения представлена в таблице 1.
Параллельно строят калибровочную кривую (см. табл. 2). Расчёт содержания фосфора в пробе Сх (мкг/мл) проводят по калибровочному графику.
Схема определения оптической плотности исследуемого раствора, содержащего фосфор.
Реактивы и этапы |
Пробы |
|
Опыт |
Контроль |
|
1. Проба (мерная пробирка) |
Весь объем |
– |
2. Молибдат аммония, мл |
2,5 |
2,5 |
3. Аскорбиновая кислота, мл |
0,5 |
0,5 |
4. Н2О |
до 10 мл |
до 10 мл |
Термостатируют 20 минут при комнатной температуре |
||
5. Фотометрируют против Н2О (λ= 670 нм, толщина кюветы 1 см) D670 |
|
|
Dоп - Dк |
|
|
Данные для построения калибровочного графика
Содержание фосфора в стандартном растворе, мкг/мл (Сх) |
Dоп-Dк |
10 |
0,26 |
20 |
0,54 |
30 |
0,80 |
Расчет результатов
По калибровочному графику находят содержание фосфора в пробе (Сх) в мкг/мл. Коэффициент пересчета содержания фосфора в одном мл: 2/7 (2 мл сыворотки + 5 мл спирта (см. пункт 1 «Депротеинизация сыворотки крови»).
Ср = [г/л], где Ср – содержание фосфора в г/л
Так как усредненная молярная масса фосфатидилхолинов 750 г/моль, а фосфора 31 г/моль, то:
Содержание фосфатидилхолинов = [г/л]
Норма: 1,5 – 2,5 г/л.
Выводы
Тестовые задания по теме: «Расщепление жиров, глицерина и высших жирных кислот»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»
Жиры расщепляются с образованием свободных жирных кислот.
Пальмитиновая и олеиновая жирные кислоты являются ненасыщенными соединениями.
Транспортной формой триацилглицеролов являются хиломикроны.
Глицерин нельзя отнести к жирам.
Наличие желчи ускоряет действие липазы.
Активирование жирных кислот требует затраты энергии.
Участвует ли карнитин в транспорте ВЖК внутрь митохондрии?
Может ли глицерин в живой клетке превращаться в 3-фосфоглицериновый альдегид?
Необходимо ли предварительное активирование жирной кислоты для синтеза нейтральных жиров?
Расщепляются ли белки под действием липазы?
Являются ли желчные кислоты производными циклопентанпергидрофенантрена?
Содержит ли фосфатидная кислота атом азота?
2) Выбрать один правильный ответ
Гормон, активирующий липазу в адипоцитах:
|
Биологической активностью обладают:
|
3) Установить соответствие для свободных и парных желчных кислот
Свободная Коньюгированная с глицином Коньюгированная с таурином |
А. Тауродезоксихолевая Б. Холевая В. Гликохолевая Г. Литохолевая |