Методика виконання кількісних визначень методами фотоколориметрії і спектрофотометрії

Вибір конкретної методики визначення в методі фотометрії залежить від властивостей досліджуваного розчину, однак у будь-якій методиці можна виділити декілька етапів.

Підготовка розчинів для аналізу

> Приготування стандартного розчину досліджуваної речовини або декількох речовин із заданою концентрацією

Стандартні розчини готують із заданої наважки речовини, яку беруть на аналітичних терезах, і розчиняють у точно виміряному об'ємі розчинника в мірній колбі;

> приготування серії еталонних розчинів із стандартного розчину (приготування шкали стандартних розчинів)

Серію (шкалу) еталонних розчинів готують із стандартного розчину способом розведення в мірних колбах. Як правило, для приготування еталонних розчинів у методиці визначення наво­дять таблицю із указаниям числа еталонів, об'ємів розчинів і вмі­стом досліджуваної речовини в кожному з еталонних розчинів;

> приготування розчину порівняння («нульового розчину»), якщо як такий не використовується чистий розчинник

Розчин порівняння готують, як і еталонний розчин. Однак до нього додають усі компоненти, крім досліджуваної речовини.

Фотометрування еталонних розчинів на фотоелектроколориметрі або спектрофотометрі

> Вибір світлофільтра або аналітичної довжини хвилі

Для цього на ФЕКі або спектрофотометрі вимірюють оптичну густину одного з еталонних розчинів шкали стандартів відносно нульового розчину в певному діапазоні довжин хвиль. У разі ро­боти з ФЕКом у світловий пучок послідовно вводять різні світло­фільтри; при роботі із спектрофотометром записування спектра здійснюється автоматично або напівавтоматично через певний інтервал довжин хвиль. У тих випадках, коли відсутня автоматич­на реєстрація спектра на папері, результати вимірювань оптичної густини заносять до таблиці. За даними таблиці будують криву світлопоглинання або спектр поглинання і обирають той світло­фільтр або довжину хвилі, при якій спостерігається максимум на кривій залежності оптичної густини від довжини хвилі;

Результати вимірювання оптичної густини розчинів при різних довжинах хвиль

Довжина хвилі, нм	λ1	λ 2	λ3	…….	……	λ n
Оптична густина	D1	D2	D3	……..	……..	Dn

> вимрювання оптичної густини еталонних розчиніві

Оптичну густину кожного з еталонних розчинів вимірюють на ФЕКі або спектрофотометрі при обраному світлофільтрі або ана­літичній довжині хвилі відповідно в кюветах з відповідного опти­чного матеріалу (скло, кварц) з точно відомою товщиною шару. Вимірювання оптичної густини завжди проводять відносно до нульового розчину, за винятком методу диференційної фотомет­рії. Результати вимірювань поміщають у таблицю, в якій вказують концентрації розчинів і відповідні їм значення оптичної густини, відзначають також і аналітичну довжину хвилі;

> обробка даних фотометрування стандартних розчинів

Залежно від обраного методу визначення концентрації дослі­джуваної речовини одержані значення оптичної густини еталон­них розчинів використовують для розрахункових методів або по­будови градуювального графіка. Градуювальний графік будують на основі таблиці в координатах: оптична густина - вміст дослі­джуваної сполуки або компонента суміші.