Что касается самой методики осуществления иммуноблоттинга, то она основана на том принципе, что каждый белковый субстрат обладает уникальной для него
Рис. 6.17. Этапы выполнения и результат иммуноблоттинга
электрофоретической подвижностью. В связи с этим на первом этапе исследования биологический материал от больного подвергают электрофорезу в геле, в результате каждый вирусный белок «продвигается» в геле на разное расстояние. Затем с геля делается «нитроцеллюлозный слепок», который обрабатывается иммуно-ферметным методом с помощью меченных ферментом моноклональных антител к каждому вирусному белку. В результате получают нитроцеллюлозную полоску, на которой, как показано на рисунке, образуются цветовые фрагменты, при этом каждому вирусному белку соответствует свое расстояние от начала полоски.
Ориентируясь на наличие и ширину каждого цветного фрагмента, получают представление не только о наличии в организме, например, ВИЧ, но и том, сколько каждого вирусного белка или антител к нему циркулирует в организме. Так, например, высокое содержание белка каписида ВИЧ (р24) свидетельствует об активном прогрессировании вирусного процесса в стадию первичных проявлений, а динамика антител к р24 и другому поверхностному белку ВИЧ gp120 позволяет прогнозировать развитие СПИД или переход в терминальную стадию инфекционного процесса.
Приложения к главе 6. Лабораторные методы
Клинический анализ крови
Цель
Выявление изменений показателей периферической крови, имеющих диагностическое и прогностическое значение.
Противопоказания
Отсутствуют.
Книга в списке рекомендаций к покупке и прочтению сайта https://meduniver.com/
Подготовка к исследованию
Плановое исследование проводят утром и желательно натощак, по экстренным показаниям и при поступлении - в любое время суток. Повторное плановое исследование проводят каждые 7-10 сут. Особенной подготовки не требуется.
Методика исследования
Кровь берут из концевой фаланги IV пальца (мочки уха или пятки у новорожденных и детей раннего возраста), предварительно обработав место прокола стерильным ватным тампоном, смоченным 70% спиртом. Прокол кожи производят одноразовым скарификатором. Первую каплю крови удаляют сухим стерильным ватным тампоном. Можно использовать кровь из вены, взятую в пробирку с ЭДТА.
Общий анализ крови включает определение количества гемоглобина, эритроцитов, тромбоцитов, ретикулоцитов, лейкоцитов (с подсчетом лейкоцитарной формулы), скорости оседания эритроцитов (СОЭ) и вычисление цветового показателя. Традиционные рутинные определения количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкограммы в современных лабораториях проводят на автоматических анализаторах; для определения СОЭ используют капилляр Панченкова. Исследование мазка крови проводят под световым микроскопом.
Интерпретация результатов
Нормальные показатели
Гемоглобин - 130-160 г/л (муж.); 120-140 г/л (жен.).
Эритроциты - 4,0-6,0×1012/л (муж.); 3,9-4,7×1012/л (жен.).
Цветовой показатель - 0,86-1,05.
Ретикулоциты - 2-10‰.
Тромбоциты - 180,0-450,0×109/л.
Лейкоциты - 4,0-9,0×109/л.
Лейкоцитарная формула:
o
миелоциты и метамиелоциты - отсутствуют;
o
палочкоядерные нейтрофилы - 1-6%;
o
сегментоядерные нейтрофилы - 47-72%;
o
эозинофилы - 0,5-5%;
o
базофилы - 0-1%;
o
лимфоциты - 19-37%;
o
моноциты - 3-11%;
o
плазматические клетки - отсутствуют.
СОЭ - 2-10 мм/ч (муж.), 2-15 мм/ч (жен.).
Для ряда инфекционных болезней характерна анемия различного генеза. Так, гипохромная анемия со снижением числа эритроцитов, уровня гемоглобина и цветового показателя типична для геморрагических лихорадок (ГЛ), тяжелых глистных инвазий; гемолитическая анемия свойственна малярии, лептоспирозу; гиперхромия - дифиллоботриозу. Анемия может иметь сочетанный генез. Так, при сепсисе возникает гемолиз и угнетение эритропоэза. Развитие анемии может быть результатом кровопотери, например, при кишечном кровотечении у больных брюшном тифом.
Важное прогностическое значение имеет тромбоцитопения, которая характерна для сепсиса, ГЛ, лептоспироза. Снижение тромбоцитов до уровня менее 30 000 в 1 мкл, как правило, сопровождается повышенной кровоточивостью.
Для инфекционных болезней, вызванных бактериальной кокковой флорой (стрепто-, стафило-, менинго-, пневмококки), некоторыми грамотрицательными палочковидными бактериями, характерен нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево. Отсутствие
Книга в списке рекомендаций к покупке и прочтению сайта https://meduniver.com/