- •Векторные системы теория
- •1. Принципы и понятия технологии рекомбинантных молекул. Основные открытия молекулярной биологии, обосновавшие возможность конструирования рекомбинантных молекул.
- •2. Матричные процессы. Репликон и типы репликации днк. Стабильность наследования генетических структур.
- •3. Механизмы реализации генетической информации.
- •4. Молекулярное клонирование как способ исследования структурной организации генетических элементов и систем экспрессии чужеродной генетической информации.
- •5. Понятие вектора. Характеристика основных генетических элементов про- и эукариотических клеток, претендующих на роль векторов.
- •6. Общие свойства клонирующих векторов. Принципы клонирования днк in vivo и in vitro.
- •7. Рестрикционные нуклеазы и их характеристика.
- •8. Способы объединения фрагментов днк. Днк-лигазы. Днк-полимераза
- •12. Концевая трансфераза и ее применение при создании рекомбинантных молекул.
- •13. Векторные молекулы днк. Развитие представлений о векторных молекулах.
- •14. Введение молекул днк в клетки.
- •15. Требования к клеткам-хозяевам рекомбинантных молекул.
- •16. Структурно-генетическая организация полового фактора.
- •17. Плазмиды бактерий и их общие свойства.
- •18. Сегрегационная и структурная нестабильность плазмид.
- •19. Классификация плазмид.
- •20. Плазмиды бактериоциногенности и векторы на их основе.
- •21. Плазмиды лекарственной устойчивости бактерий.
- •22. Конструирование и структура «искусственных» векторов (плазмиды pRsf2124 и рМв9).
- •23. Принцип модульной организации плазмид.
- •24. Мигрирующие элементы и конструирование векторов для клонирования хромосомных генов бактерий in vivo.
- •25. Трансдуцирующие бактериофаги.
- •26. Организация генома бактериофага лямбда.
- •27. Общая и генерализованная трансдукция.
- •28. Характеристики pBr322, ее преимущества и недостатки.
- •29. Векторы на основе репликонов бактериальной плазмиды puc18, puc19.
- •30. Свойства бактериофага лямбда как универсальной системы для клонирования in vivo и in vitro.
- •31. Молекулярные векторы на основе генома бактериофага лямбда.
- •32. Космиды.
- •33. Фазмиды.
- •34. Искусственные хромосомы (рас, вас, yac)
- •35. Конструирование библиотек и клонотек.
- •36. Нитевидные фаги в качестве клонирующих векторов.
- •37. Конструкция и использование векторов на основе нитевидных фагов.
- •38. Векторы, предназначенные для изучения регуляции экспрессии генов.
- •39. Векторы для Bacillus.
- •40. Проблемы плазмидных векторов.
- •41. Челночные векторы.
- •42. Генетическая организация дрожжей.
- •43. Внехромосомные элементы сахаромицетов.
- •44. Введение днк в дрожжевые клетки.
- •45. Векторы для дрожжевых клеток. Требования к вектору.
- •46. Селективные маркеры дрожжей. Принципы клонирования.
- •47. Введение молекул днк в клетки млекопитающих.
- •48. Организация генома вируса sv40. Векторы на основе вируса sv40.
- •49. Основные проблемы при конструировании векторов млекопитающих.
- •50. Векторы для клонирования в растениях.
- •51. Молекулярная биология Ti-плазмиды Agrobacterium tumefaciens.
- •52. Структура т-днк. Использование Ti-плазмиды в качестве векторов для создания трансгенных растений.
- •53. Бинарные системы.
- •54. Вирусы как векторы для растений.
25. Трансдуцирующие бактериофаги.
Ответ. Бактериофаг иначе фаг; вирус бактерий – вирус, способный паразитировать в бактериальных клетках. Вирусы, вызывающие гибель (лизис) инфицированных бактерий, известны как литические бактериофаги (фаги). Так называемые умеренные бактериофаги встраивают собственную ДНК в хромосому бактерии. Синтез вирус-специфических белков и нуклеиновых кислот у таких фагов подавлен специфическим репрессором, поэтому бактерия не погибает и становится «иммунной» к повторному заражению (лизогения). Ассоциация фаговой ДНК с геномом бактерии способна качественно изменять антигенные или морфологические свойства бактериальной клетки, обуславливать синтез факторов вирулентности (лизогенная конверсия). ДНК умеренных вирусов реплицируется синхронно с размножением лизогенной бактерии, но иногда (примерно в одной из 102–105 подобных бактерий) фаг начинает спонтанно размножаться и лизировать клетку. Размножаясь в клетке, некоторые умеренные бактериофаги способны захватывать гены бактерии и, инфицируя другие клетки, передавать гены новому хозяину (трансдукция). Трансдуцирующие фаги переносят только бактериальную ДНК (общая трансдукция) или вирусную ДНК, участок которой замещен на бактериальную ДНК (специфическая трансдукция). Такие фаги не способны образовывать дочерние популяции, т. е. являются дефектными. Дефектные фаги используют в генной инженерии в качестве векторов. Исследования на бактериофагах позволили разрешить ряд важнейших проблем молекулярной биологии и молекулярной генетики. На модели бактериофагов было доказано, что материальным носителем наследственности является ДНК; были открыты феномены модификации-рестрикции, транскрипции; проведены исследования по изучению репликации, рекомбинации, морфогенезу. В основу классификации фагов положены антигенная структура, морфология фагов, спектр действия, химический состав и др. Большинство фагов относится к ДНК-содержащим вирусам с нуклео-капсидом, организованным по принципу смешанной симметрии. По спектру действия выделяют типовые фаги (Т-фаги), лизирующие бактерии отдельных типов внутри вида; моновалентные фаги, лизирующие бактерии одного вида; и поливалентные фаги, лизирующие бактерии нескольких видов. Бактериофаг phi29 обладает сложной системой для упаковки ДНК в капсид. Этот хорошо изученный наномотор можно химически и генетически модифицировать для того, чтобы встроить его в липосомальную мембрану и использовать в системах доставки лекарственных средств для их контролируемого высвобождения в патологическом очаге. На основе массивов из модифицированных наномоторов, распознающих различные биомаркеры, разрабатываются чувствительные сенсоры для in vitro диагностики. Бактериофаги (их капсиды), так же как и другие вирусы, могут быть использованы как строительные леса, задающие определенное пространственное расположение небиогенным наночастицам. Подобные «строительные леса» позволяют не только создавать планарные структуры определенной формы и размера, но и перейти к проектированию и созданию трехмерных наноконструкций, таких сложных, как тетраэдр или сфера. В результате могут быть получены наноструктуры или материалы с новыми полезными свойствами для применения в самых различных областях нанотехнологий.