- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента.
- •План практических занятий.
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии.
- •Обязанности дежурного.
- •Дополнительный материал к занятию. Правила микроскопии с иммерсионной системой.
- •Контрольные вопросы.
- •Техника окраска по Граму в модификации Синёва.
- •Отношение бактерий к окраске по Граму.
- •Окраска по Цилю-Нильсену.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •2. Продемонстрировать овладение умениями, полученными при изучении морфологии микробов.
- •Контрольные практические задачи по разделу «История микробиологии. Морфология микробов и вирусов».
- •Контрольные вопросы по разделу «История микробиологии. Морфология микробов и вирусов» (подробную расшифровку вопросов смотрите в занятиях 1-5).
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительная литература по разделу «Физиология микробов. Микробиологические исследования лекарственных средств» (занятия 6-14)
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задание на самостоятельную работу.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Методы контроля стерильности.
- •Методы частичного обеспложивания.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Объекты микробиологического контроля, отбор проб, методика исследования, оценка результатов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания на самостоятельную работу.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства.
- •Исследование лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Контрольные практические задания по разделу «Физиология микробов. Микробиологические исследования лекарственных средств».
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам.
- •Диско-диффузионный метод.
- •Метод серийных разведений.
- •Метод серийных разведений антибиотика в агаризованной среде.
- •Метод е-тестов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде).
- •Фаготипирование бактерий.
- •Применение бактериофагов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 37 Возбудители вирусных инфекций. Цель самоподготовки.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии.
- •Экзаменационные вопросы по курсу микробиологии.
- •305041, Г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
- •305041, Г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
Исследование лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства.
В отношении лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства, проводится испытание на микробиологическую чистоту. Это испытание включает в себя количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах.
Испытание проводят в асептических условиях. Лекарственные средства, обладающие антимикробным действием, и консерванты, входящие в состав некоторых лекарственных средств, могут подавлять рост отдельных видов микроорганизмов при проведении испытаний. Во избежание неправильной оценки результатов испытания определяют действие лекарственного средства в отношении тест - микробов. Для испытания антимикробного действия лекарственного средства, не стерилизуемого в процессе производства применяют тест-микробы: B.subtilis, B.cereus, E.coli, S.aureus, Salmonella abony, Candida albicans, Aspergillus. Предварительно готовят разведения лекарственного средства: 1:10, 1:50, 1:100, 1:500, 1:1000. В пробирки с питательными средами вносят по 1мл каждого разведения, в контрольные пробирки – по 1мл стерильной дистиллированной воды. Затем во все пробирки вносят по 0,1мл микробной взвеси тест-штамма. При обнаружении антимикробного действия лекарственного средства устраняют его и после этого производят посев на микробиологическую чистоту. При отсутствии антимикробного действия производят прямой посев.
Количественное определение бактерий и грибов проводят двухслойным агаровым методом в чашках Петри.
1. Определение общего числа бактерий. Испытуемый раствор вносят по 1 мл в каждую из 2 пробирок с 4 мл расплавленного и охлаждённого до 45‑50°С МПА. Быстро перемешивают содержимое каждой пробирки и переносят в чашку Петри, содержащую 15-20 мл застывшего агара. Быстрым, осторожным покачиванием чашки Петри равномерно распределяют верхний слой агара.
После застывания среды чашки Петри переворачивают и инкубируют в течение 5 суток при 30-35°С. Через 48 часов и окончательно через 5 суток подсчитывают количество бактериальных колоний на 2 чашках, вычисляют среднее значение и таким образом находят число бактерий в 1 мл образца.
2. Определение общего числа грибов. Испытание проводят двухслойным агаровым методом, используя плотную среду Сабуро. Инкубируют посевы при 20-25°С. Через 72 часа и окончательно через 5 суток подсчитывают общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов на 2 чашках, находят среднее значение.
Выявление и идентификация видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах: бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.
1. Выявление и идентификация бактерий семейства Enterobacteriaceae.
Образец испытуемого лекарственного препарата в количестве 10 мл вносят в 100 мл лактозного бульона, перемешивают и инкубируют при 30-35°С в течение 2-5 часов. Затем из этой смеси 10 мл переносят в 100 мл среды обогащения. Оставшуюся смесь в лактозном бульоне оставляют в холодильнике. Посев в среде обогащения инкубируют при 30-35°С в течение 18-24 часов. При отсутствии роста считают, что в препарате не содержатся бактерии семейства Enterobacteriaceae.
При наличии роста исследование продолжают. Определяют следующие показатели:
а) наличие Escherichia coli
б) наличие видов Salmonella
в) количество энтеробактерий (кроме Salmonella и Escherichia coli)
а) Испытание на виды Salmonella проводят путём высевания из среды обогащения на чашки с висмут - сульфит агаром. На этой среде Salmonella образуют чёрные колонии с металлическим блеском, при этом участок среды под колонией прокрашивается в чёрный цвет. Подозрительные колонии микроскопируют, отсевают на среду Олькеницкого (трёхсахарный агар с солями железа) и ставят тест на цитохромоксидазу.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано (заражено) бактериями рода Salmonella.
б) Испытание на Escherichia coli проводят путём высева из среды обогащения на чашку со средой Эндо. Подозрительные колонии красного цвета микроскопируют и при наличии грамотрицательных палочек делают пересев в пробирке с цитратным агаром Симмонса, на котором определяют утилизацию цитрата натрия по изменению цвета среды с зелёного на синий. Наличие индола определяют путём посева в питательный бульон.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано Escherichia coli.
в) Количественное определение энтеробактерий (кроме Salmonella и Escherichia coli. Смесь в лактозном бульоне (из холодильника) в объёме 10 мл, 1 и 0,1 мл (что соответствует 1,0 и 0,1 г и 0,01 г препарата)) засевают в среду обогащения, инкубируют при 30-35°С в течение 18-24 ч. В случае роста делают пересев на чашку со средой Эндо и по появлению типичных колоний грамотрицательных бактерий устанавливают наличие энтеробактерий в определённом объёме препарата.
2. Выявление и идентификация Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus.
Образец в количестве 10 мл вносят в 100 мл среды обогащения, перемешивают и инкубируют при 30-35°С в течение 24-48 часов. При наличии роста пересеивают на чашку со средой для выявления пиоцианина и на чашку среды с маннитом. После инкубации в термостате отбирают подозрительные колонии.
Идентифицируют Pseudomonas aeruginosa по морфологии (грамотрицательные неспорообразующие палочки), по специфическому запаху и сине - зелёному пигменту, наличию фермента цитохромоксидазы.
Staphylococcus aureus идентифицируют по морфологии (грамположительные кокки), по сбраживанию маннита в анаэробных условиях, по реакции плазмокоагуляции.