Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства.

Лекарственные средства для инъекций, глазные капли, мази, плёнки, другие лекарственные средства, в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно - технической документации (НТД), должны быть стерильными.

Отбор образцов для анализа - число образцов из каждой серии от 3 до 40, в зависимости от метода стерилизации, для автоклавированных средств - 10. Для исследования лекарственные средства должны быть приготовлены в виде растворов, суспензий или эмульсий.

Определение антимикробного действия лекарственного средства. Во избежание неправильной оценки результатов анализа необходимо определить однократно для каждого наименования лекарственного средства, обладает ли оно антимикробным действием.

Для определения антимикробного действия из ампулы с лекарственным средством следует внести по 1 мл в 3 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в 1 пробирку с 10 мл жидкой соево-казеиновой среды или среды Сабуро. Для контроля в 3 пробирки с тиогликолевой средой и в пробирку с 10 мл жидкой соево-казеиновой среды или среды Сабуро вносится по 1 мл стерильной дистиллированной воды.

Затем во все пробирки следует внести по 0.1 мл микробной взвеси тест - штамма, содержащего 1000 клеток в 1 мл. В пробирки с тиогликолевой средой вносятся штаммы Staphylococcus aureus; Bacillus subtilis; Escherichia coli; в пробирки с соево-казеиновой средой или средой Сабуро - Candida albicans

Таблица

Определение антимикробного действия лекарственных средств

	Пробирки с тиогликолевой средой						Пробирки с соево-казеиновой средой или Сабуро
Номера пробирок	1	2	3	4	5	6	7	8
Лекарственное средство	1,0	1,0	1,0				1,0
Дистиллированная вода				1,0	1,0	1,0		1,0
Staphylococcus aureus	0,1			0,1
Escherichia coli		0,1			0,1
Bacillus subtilis			0,1			0,1
Candida albicans							0,1	0,1

Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при 30-35°С в течение 2 суток, а на соево-казеиновой среде или среде Сабуро - при 20-25°С в течение 3 суток.

При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства в опытных и контрольных пробирках должен наблюдаться рост перечисленных тест - микробов.

В этом случае можно продолжать исследование и провести прямой посев данного лекарственного средства на стерильность.

При наличии антимикробного действия устраняют его. Для этого используют:

1. Соответствующие инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях (например, пара-аминобензойная кислота для сульфаниламидов, пенициллиназа - для пенициллинов и цефалоспоринов).

2. При отсутствии соответствующего инактиватора препарат при посеве разводят, увеличивая объём питательной среды до 250 мл.

3. Если при этом сохраняется антимикробное действие лекарственного средства, для посева используют метод мембранной фильтрации.

Посев лекарственных средств на стерильность (метод прямого посева). Испытуемый препарат, если необходимо, растворяют в соответствующем растворителе и высевают в количествах, указанных в таблице.

Количество испытуемого препарата для посева в зависимости от объёма содержимого единицу (ампул, флаконов), составляющих серию.

Объём содержимого одной единицы, мл	Объём лекарственного средства для посева, мл	Объём питательной среды
менее 1	весь объем	в 10 раз больше
1-4	1	объёма образца
5-19	2	для
20-100	2-4	посева
более100 *	10

* - Если объём содержимого единицы превышает 100 мл, предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации.

Посевы с тиогликолевой средой инкубируют при температуре от 30 до 35°С, а в соево-казеиновой среде или среде Сабуро - от 20 до 25°0С. Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 суток. Если во всех посевах роста нет, лекарственный препарат стерилен.

Метод мембранной фильтрации. При определении стерильности лекарственных средств, обладающих антимикробным действием, и лекарственных средств, разлитых в ёмкости больше 100 мл, используют метод мембранной фильтрации. Лекарственное средство фильтруют в асептических условиях через 2 мембранных фильтра, затем смывают 3-4 порциями по 100 мл физ. раствора. Каждую мембрану стерильными ножницами разрезают пополам, половину помещают в тиогликолевую среду, половину - в жидкую соево-казеиновую среду или среду Сабуро.

Посевы выдерживают в термостате при тех же температурах в течение 7 суток при ежедневном просмотре. Для контроля полноты смывания другую мембрану разрезают пополам, и по половине мембраны помещают в питательные среды, куда засевают тест - микробы:

Staphylococcus aureus и Candida albicans. Наличие роста этих микробов после инкубации в термостате указывает на полноту смывания. Для контроля стерильности условий фильтрования производят фильтрование растворителя, и фильтры засевают в те же питательные среды.

Испытание на пирогенность проводится путём введения воды или лекарственного средства кроликам с измерением ректальной температуры. При этом строго соблюдаются условия, исключающие возможность повышения температуры тела кроликов от случайных причин.

Вода для инъекций или раствор лекарственного средства считается пирогенным, если повышение температуры тела кроликов превышает предельные показатели, указанные в фармакопее.

О пирогенности подробнее см. раздел «Инфекция».