VI. Механизм антигенных сдвигов (значительных антигенных изменении)

В ходе антигенных изменений другого рода поверхностные субъединицы вируса испытывают значительные антигенные сдвиги. При этих значительных сдвигах происходят внезапные и полные изменения одного или обоих поверхностных антигенов, так что 'возникают «новые» вирусы, к которым иммунитета в популяции нет. Это именно те вирусы, которые вызывают пандемии гриппа.

Вирусы гриппа человека H2N2 являются естественной системой для изучения молекулярных аспектов значительных антигенных сдвигов. Вирусы, появившиеся у человека в 1957 г., обладали субъединицами НА и NA, которые полностью анти-■генно отличались от таковых штаммов H1N1. Вирусы H2N2

испытывали антигенный дрейф до 1968 г., когда появился «новый» пандемический штам;м Гонконг. .Вирусы А2 (H2N2) и штамм Гонконг (H3N2) возникли в Китае. Вирус Гонконг обладал той же NA, что и предшествующие вирусы А2, но ан-тигенно отличающимся НА (Coleman et al., 1968; Schulman, Kilbourne, 1969). Это четко 1было показано с помощью специфических антисывороток к выделенным субъедивицам НА представителей вирусов гриппа типа А2, (Выращенных в куриных эмбрионах. Эти моноспецифические сыворотки использовали в РТГА с вирусами, выращенными в утиных эмбрио-•на'х (Webster, Laver, 1972), что снимало проблемы стериче-ского подавления гемагглютинащии антителами к NA и антигена клетки-хозяина, .которые могут иметь место при использовании сывороток к целым вирусам.

Результаты этих тестов (табл. 27) показали, что серологического соответствия между гемагглютининовыми антигенами «старых» штаммов А2/Азия, выделенных между 1957 и

1968 г., и вирусом Гонконг (1968) не было. Среди трех штаммов Гонконг, ^выделенных в течение первых 3 лет пандемии этого гриппа, имелись лишь очень небольшие вариации или их совсем не было (Webster, Laver, 1972). Откуда же тогда появились «новые» субъединицы НА вируса гриппа Гонконг? По-видимому, имеются две возможные, причины образования «новых» гемапглютинирующих субъединиц: или они произошли в результате мутации из лредсуществовавшего вируса гриппа человека или пришли из некоторого другого источника, такого, как вирусы гриппа животных или птиц.

Одиночная мутация «старого» вируса гриппа А2/Азия могла бы вызвать сворачивание полипептидных цепей субъединиц НА таким образом, чтобы образовались полностью новые

антигенные детерминанты. Если бы субъединицы НА вируса гриппа Гонконг были получены путем такой мутации из более ранних вирусов типа А2, то последовательность аминокислот в полипептидах «старых» и «новых» субъединиц должна быть близка. Ранее описан полный сдвиг в одной из антигенных детерминант субъединиц НА, который произошел в процессе антигенного дрейфа, и этот «сдвиг» в одной из-детерминант не сопровождается, ио-шидимому, какими бы то» ни было значительными общими изменениями последователь' Н'Ости аминокислот в полипептидах НА. Однако если «новые» субъединицы не возникают путем мутации и отбора, а приходят от вируса гриппа животных, то их полипептидные цепи могут значительно отличаться по последовательности аминокислот от лолипаптидных цепей «старых» вирусов А2/Азия.

Субъединицы НА были выделены из трех штаммов гриппа А2/Азия, полученных в 1968 т. до наступления пандемии гриппа Гонконг, и из трех штаммов вируса гриппа Гонконг, изолированных в различных частях мира в 1968, 1970 и 1971 гг. Вследствие антигенного дрейфа три вируса, выделенных в конце периода существования А2/Азия, проявляют значительные антигенные отличия. С другой стороны, три штамма Гонконг, которые были выделены в течение первых 3 лет новой пандемии, почти не проявляют антигенной изменчивости.

Субъединицы НА, выделенные из каждого из этих шести вирусных штаммов, диссоциировали путем обработки гуани-дингидрохлоридом и дитиотреитолом и при центрифугировании разделяли их легкие итяжелые цели (Laver, 1971). Каждую из выделенных полипептидных целей обрабатывали трипсином и картировали трилтические пептиды. Карты показали, что полипептидные цепи из гемагглютинирующих субъединиц «старых» вирусов А2, выделенных в 1968 г., значительно отличались по составу аминокислот от лолилептид-ных цепей «новых» штаммов Гонконг !(40 и 41). При этом предположили, что «новые» полипелтиды не (получены путем мутации из «старых» (Laver, Webster, 1972).,

Одно из объяснений такого результата состоит в предположении мутации со сдвигом рамки, приводящей к появлению полипептидов с полностью отличной последовательностью аминокислот. Однако кажется маловероятным, чтобы такая мутация, если она и происходит, приводила к появлению полипелтидов, способных образовать функциональную гемагглютинирующую единицу. Второе — могут происходить мутации, задевающие главным образом основные аминокислоты, так что карты триштических пептидов могли бы значительно отличаться без какого-либо существенного изменения общей последовательности аминокислот в лолилелти-дах.

В «астоящее время получены данные, указывающие на некоторые вирусы -гриппа животных как на возможные предшественники шта1М'ма Гонконг вируса гриппа человека. Два штамма вируса гриппа, А/лошадь/Майами/1/63 (Heq2Neq2) ■и А/утка/Украина/1/63 (Hav7Neq2), выделенные от лошадей и уток в 1963 г., т. е. за 5 лет до появления гриппа Гонконг среди людей, оказались, как было показано, антигенно близкими штамму Гонконг (Coleman et al., 1968; Masurel, 1968; Kaplan, 1969; Zakstelskaja et al., 1969; Tumova, Easterday, 1969; Kasel et al., 1969).

Субъединицы НА вирусов лошадей и уток давали в РТГА и в тесте иммунодиффузии перекрестные реакции с субъедивицами штамма Гонконг вируса гриппа человека А/Гон-конг/1/68 (H3N2). Более того, пептидные -карты легких иоли-пептидных цепей из темапплютинирующих субъединиц вирусов лошадей, утак и человека были почти идентичными, иа основании чего предположили, что легкие цепи из этих трех штаммов имеют практически одинаковые последовательности аминокислот (Laver , Webster, 1973). Это отчетливо видно из 42, где пептидные жарты легких лолипептидных цепей из субъединиц НА вируса гриппа Гонконг и из штаммов утка/ /Украина и лошадь/Майами (2-й серотип) почти идентичны и значительно отличаются от карты легких лолипаптидных цепей ,из «старого» вируса Азия/68.

Эти результаты дают основание полагать, что вирусы лошадей и птиц и вирус человека штамма Гонконг могли возникнуть путем генетической рекомбинации от общего прародителя, и предложить альтернативный по отношению к мутация механизм для объяснения возникновения вируса гриппа Гонконг.

Впервые предположение об .'участии вирусов гриппа лошадей в пандемии гриппа среди людей возникло из наблюдений, сделанных во время эпидемии 1963 г. (Molineux, 1965). С тех пор многие авторы указывали на животных, 1как на .источник вирусов гриппа человека. К тому же появление вирусов гриппа Азия/57 и Гонконг, а возможно, и предыдущих вирусов в Азии (Chu, 1958; Andrewes, 1959; Kaplan, Payne, 1959; Francis, Maassab, 1965; Hoyle, 1968) привело многих к предположению о 'существовании в Китае .'некоторого резервуара животных.. Andrewes (1959) писал1: «...возможно, вирус гриппа А является вирусом, недостаточно приспособленным к тому, чтобы быть постоянным паразитом человека, и имеет тенденцию \к вымиранию, что, по-видимому, и происходило в десятилетия перед 1889 г., но он все же возникает время от времени вновь, имея источникам некоторого неизвестного хозяина, обитающего в Центральной Азии, с которым он находится в постоянных взаимоотношениях».

Недавние исследования показали, что в сыворотках диких птиц содержатся антитела, направленные против антигенов, присутствующих в вирусах гриппа, инфицирующих человека (World Health Organization, 1972). Кроме того, недавно вирусы гриппа были выделены от диких птиц, удаленных от ло-пуляций человека, что предполагает грипп .как естественную инфекцию птиц в течение многих тысяч лет (Downie, Laver, 1973).

Rasmussen (1964) первый (предположил, что пандемические вирусы гриппа возникают из таких вирусов животных в результате процесса рекомбинации. Впоследствии Tumova и Pereira (1965), Kilbourne (1968) и Easterday с соавт. (1969) получили антигенно-гибридные вирусы путем генетической рекомбинации in vitro между вирусами гриппа человека и штаммами вирусов гриппа животных и птиц. Недавно Webster и соавт. (1971, 1973) имитировали возникновение нового пандемического штамма вируса гриппа .в опытах in vivo (они будут 'описаны далее).