2. Проведение исследования.

Путём пункции вены набирают кровь в сухую чистую пробирку (без стабилизатора). На пробирке должны быть обозначены: фамилия, начальные буквы имени и отчества больного, его возраст, номер истории болезни, дата взятия крови.

В специально отведённую центральную лунку тарелки помещают кровь из этой пробирки; в случае необходимости получают кровь проколом пальца больного.

Для перепроверки группы консервированной донорской крови осторожно перемешивают содержимое пластикового пакета, затем отрезают длинную трубку, а кровь, находящуюся в ней помещают в специально отведённую лунку тарелки (для определения групп крови). Эту же кровь используют не только для определения (переопределения) групповой и резус – принадлежности крови донора, но и для проведения проб на индивидуальную совместимость перед гемотрансфузией.

На тарелку (пластинку) наносится фамилия, начальные буквы имени и отчества больного или номер пластикового контейнера (пакета), если кровь донорская. Заполняют бланк сопроводительного направления крови больного (в лабораторию): также указывают фамилию, начальные буквы имени и отчества, возраст больного, номер истории болезни, номер отделения, номер палаты, домашний адрес, диагноз заболевания, дату определения группы крови в отделении, номера серий стандартных сывороток, которыми определяли группу крови в отделении.

По окончании исследования туда также вписывают результат исследования: указывают группу крови, например «В (III)». Результат исследования должен быть заверен подписями врача и медсестры, которые производили исследование.

В лунки (углубления) пластинки, соответственно обозначениям групп крови, наносят отдельными пипетками из каждого флакончика по две большие капли стандартных сывороток (двух различных серий каждой группы I,II,III) так, что образуются три пары больших (около 1см в диаметре) капель.

Рядом с каждой большой (0,1мл) каплей стандартной сыворотки отдельными стеклянными палочками (уголками предметных стёкол) помещают по одной маленькой (0,01мл) капле исследуемой крови (осадка эритроцитов), то есть в 10 раз меньшее количество.

Стандартную сыворотку и эритроциты исследуемой крови (соотношение 10:1) тщательно перемешивают отдельными сухими стеклянными палочками (уголками предметных стёкол) до тех пор, пока смесь не окрасится в равномерный красный цвет.

При необходимости, в виде исключения, можно делать проще: отдельными стеклянными палочками (уголками предметных стёкол) последовательно переносят исследуемую кровь из её лунки, в каждую из шести капель стандартных сывороток (в соотношении 1:10) и осторожно перемешивают до тех пор, пока смесь не окрасится в равномерный красный цвет.

После перемешивания капель, пластинку покачивают, затем оставляют в покое, затем снова периодически покачивают, наблюдая за ходом реакции. Агглютинация обычно начинается в течение первых 10 – 30 секунд. Она заметна в каплях в виде песчинок, зёрнышек более насыщенного красного цвета, чем окружающая их жидкость.

По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин., в капли, в которых наступила агглютинация эритроцитов, для исключения ложной агглютинации, добавляют по одной капле (0,05мл) изотонического раствора натрия хлорида, перемешивают и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5 минут. После чего оценивают результаты исследования.

Туда, где в смеси сыворотки и крови имеется сомнительная агглютинация, можно добавить по одной капле (0,05мл) изотонического раствора хлорида натрия, после чего дают заключение о групповой принадлежности исследуемой крови по системе АВО.

Оценка результата исследования, его регистрация.

Реакция считается положительной, если наступила агглютинация эритроцитов, т.е. появились мелкие красные зёрнышки, при этом окружающая их жидкость частично или полностью обесцвечивается.

Реакция считается отрицательной, если не наступила агглютинация, т.е. капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких зёрнышек.

Результаты реакции в каплях с одногруппными сыворотками двух разных серий должны совпадать.

Результаты реакций со стандартными сыворотками						Исследуемая кровь принадлежит к группе
Сыворотка АВ(IV)	Сыворотка В(III)		Сыворотка А(II)	Сыворотка 0(I)
нет антител (контроль)		антитела анти - А	антитела Анти – В		антитела анти – А анти – В
		-	-		-	ОI
		+	-		+	А(II)
		-	+		+	В(III)
-		+	+		+	АВ (IV)

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации;

Знаком минус (-) обозначено отсутствие агглютинации.

При оценке результатов исследования могут быть получены четыре варианта:

» Если с сыворотками 0(I) (антитела «анти – АВ»), А(II) (антитела «анти – В»), В(III) (антитела «анти – А») нигде нет агглютинации, это значит, что эритроциты исследуемой крови не содержат антигенов А и В, то есть, исследуемая кровь принадлежит к группе О(I).

» Если сыворотки группы 0(I) (антитела «анти – АВ») и сыворотки группы В(III) «(антитела анти – А») дали агглютинацию эритроцитов, а с сыворотками А(II) (антитела «анти – В») нет агглютинации, значит эритроциты исследуемой крови содержат антиген А, т.е. кровь принадлежит к группе А(II).

» Если агглютинация эритроцитов исследуемой крови наступила с сыворотками группы 0(I) (антитела «анти – А В») и с сыворотками группы А(II) (антитела «анти – В»), и нет агглютинации с сыворотками В(III) (антитела «анти – А»), значит эти эритроциты содержат антиген В, т.е. кровь принадлежит к группе В(III).

» Если сыворотки 0(I) (антитела «анти – АВ»), А(II) (антитела «анти – В») и В(III) (антитела «анти – А») дали агглютинацию эритроцитов исследуемой крови, то это значит, что эти эритроциты содержат антигены А и В. Это позволяет предположить, что исследуемая кровь принадлежит группе АВ(IV). В этом случае, для окончательного заключения о групповой принадлежности исследуемой крови. необходимо дополнительно провести контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВ(IV), для исключения явления панагглютинации (неспецифической всеобщей агглютинации).

Лишь отсутствие агглютинации исследуемой крови с сывороткой группы АВ(IV), позволяет сделать окончательное заключение о принадлежности крови к группе АВ(IV).

Если же агглютинация исследуемой крови наблюдается и в сыворотке группы АВ(IV) , это означает, что наблюдается явление панагглютинации (всеобщей неспецифической агглютинации).

Также, и любой другой результат исследования, не соответствующий вышеописанным четырем результатам исследований, необходимо считать не достоверным, так как он не позволяет судить о групповой принадлежности исследуемой крови.

Результат исследования группы крови больного записывают в "истории болезни" в графе "особые отметки". Например: «Группа крови В_(III)». Также обязательно указывают номера серий использованных стандартных сывороток разных групп, а также фамилии и подписи врача и медсестры, проводивших исследование.

Подобным же образом результат исследования, номера сывороток, фамилии и подписи врача и медсестры, заносят в бланк сопроводительного направления крови больного в лабораторию.

Результат перепроверки группы донорской крови из пластикового контейнера записывают в "историю болезни", возле протокола переливания крови, подобным же образом: указывают группу крови, номера серий использованных сывороток, фамилии и подписи врача и медсестры.

Для переопределения группы крови больного перекрёстным способом и для определения резус–принадлежности крови больного, в лабораторию доставляют пробирку с кровью больного, взятой из вены (без стабилизатора) с сопроводительным направлением. В лаборатории перепроверяют группу крови больного перекрёстным способом и определяют резус–принадлежность.

Результаты своих исследований врач–лаборант записывает на сопроводительном бланке направления крови в лабораторию, присланном из отделения вместе с пробиркой и возвращает в отделение этот бланк, который медсестра подклеивает к "истории болезни".

Лечащий врач, сверив результат своего исследования с результатом, полученным из лаборатории, записывает на лицевой стороне "истории болезни" сведения о группе крови системы АВО и «Резус–принадлежности», обозначая «Резус – принадлежность» знаком «+» или «-» и прописью «(полож.)» или «(отриц.)», т.е. Rh+ (полож.) илиRh- (отриц.). Если результаты исследования в отделении и в лаборатории расходятся между собою – оба исследования необходимо повторить.

Категорически запрещается перенос на лицевую сторону "истории болезни" ("истории родов") данных о группе крови и резус – принадлежности крови с паспорта, с амбулаторной карты больного, с обменной карты беременной и с других документов, а также запрещается использование этих данных при переливании крови, её компонентов.