- •Глава1.
- •Частьii.Собственныеисследования
- •Глава2. Материалыиметоды…………………………………………502.1.Общаяхарактеристикабольных……………………………………………50
- •Глава3.Результатыисследования………………………………...74
- •Глава4.Обсуждениеполученныхрезультатов…………. 221
- •Списоксокращений
- •Введение Актуальностьпроблемы
- •Научнаяновизнаисследования
- •Практическаязначимость
- •Основныеположения,выносимыеназащиту
- •Внедрениерезультатов работывпрактическоездравоохранение
- •Апробацияработы
- •ГлаваI обзорлитературы
- •ЭтиологияипатогенезИап
- •Классификация,клиническиеособенности иап
- •Пузырчаткавульгарная(Pemphigusvulgaris)
- •Пузырчаткалистовидная(эксфолиативная) /Pemphigusfoliaceus/
- •Паранеопластическаяпузырчатка(Paraneoplasticpemphigus)
- •1.5.1Общиепредставленияомолекулярной фармакологииСгк
- •СтроениеГр:
- •ИзоформыГр:
- •ЛечениебольныхИап
- •АдьювантнаятерапиябольныхИап
- •Азатиоприн
- •ЦиклоспоринA
- •Метотрексат
- •МофетилМикофенолат
- •Циклофосфамид
- •Никотинамидитетрациклин
- •Соли золота
- •Внутривенный иммуноглобулин
- •Пиридостигминабромид
- •Стероиднаярезистентность
- •Механизмы стероидной резистентности на рецепторномуровне
- •Механизмыстероиднойрезистентностинапострецепторномуровне
- •ЧастьIi.Собственныеисследования
- •Глава2.Материалыиметодыисследования
- •Общаяхарактеристикабольных
- •Характеристика больных иап, находившихся поднепосредственнымнаблюдением
- •ИзучениекатамнестическихданныхбольныхИап
- •2.1.3. Изучение клинических данных больных для определениямолекулярныхмеханизмовстероиднойрезистентности
- •МужчиныЖенщины
- •В%соотношении
- •Оборудование
- •Изучениехарактерасвязываниясмембраннымирецепторамипо
- •Исследование связывания меченого сгк внутриклеточными
- •Полимеразно-цепнаяреакцияврежимереальноговремени
- •Описаниеметода:
- •Исследование молекулярных механизмов стероиднойрезистентности напострецепторномуровне
- •Реактивы
- •Оборудование
- •Приготовлениереактивов
- •Полимеразно-цепнаяреакция
- •Определениефакторанекрозаопухолиα (tnf-α)
- •Радиоизотопныйметод
- •Постановкарадиоизотопногометода
- •Жидкостнаясцинтилляционнаярадиометрия
- •Статистическаяобработкарезультатовисследования
- •Глава3.Результатыисследования
- •Ретроспективный анализисторийболезнибольныхИап
- •Общая характеристикаклиническихданныхбольныхИап
- •Количествобольныхв%соотношении
- •% Отр. 52 Положит. 48 46
- •КоличествоСр(-)больныхИап в%соотношении
- •Нетадювантнойтерапии
- •Такимобразом:
- •3.1.2. ХарактеристикастероидчувствительныхбольныхИап
- •КоличествоСр(-)больныхИаПв %соотношении 60%
- •КоличествоСр(-)больныхИап в%соотношении
- •% Отр. 58 Положит. 42 0
- •КоличествоСр(-)больных иаПв%соотношении 80%
- •КоличествоСр(-)больныхИаПв %соотношении 100%
- •Такимобразом:
- •3.1.3.ХарактеристикастероидрезистентныхбольныхИап
- •%Соотношении
- •В%соотношении
- •Онкология
- •Такимобразом:
- •КоличествобольныхИаПв% соотношении 60%
- •КоличествобольныхИаПв% соотношении 100%
- •КоличествобольныхИаПв% соотношении
- •КоличествоСр(-)больныхИаПв %соотношении 80%
- •Такимобразом:
- •Молекулярныемеханизмыстероиднойрезистентностинарецепторномуровнеубольныхистиннойакантолитическойпузырчаткой
- •ИзучениеуровняэкспрессиимРнКα-иβ-изоформглюкокортикоидныхрецепторовустероидрезистентныхистероидчувствительныхбольныхИап
- •Бетарецептор альфарецептор
- •3.2.2АнализклиническихданныхбольныхИаПприизменениинауровнеα-иβ-изоформглюкокортикоидныхрецепторов
- •3.2.3.Изучениеколичествамембранныхивнутриклеточныхрецепторовустероидрезистентныхистероидчувствительныхбольных
- •10*3/Клетку
- •10*3/Клетку
- •3.2.4АнализклиническихданныхбольныхИаПприизменениимембранныхивнутриклеточныхрецепторов
- •МолекулярныемеханизмыстероиднойрезистентностинапострецепторномуровнеубольныхИап
- •ИзучениевключениямеченогоуридинавРнКлимфоцитовпериферическойкровиустероидрезистентныхистероидчувствительныхбольныхИап
- •Количествовключенногоуридинав
- •Значимыйпоказатель
- •АнализклиническихданныхбольныхИаПприизменениивключения ³н-уридина
- •3.4.РазработкалечениябольныхИаПазатиоприномпристероиднойрезистентности
- •3.4.1Клиническиеданныеприпримененииазатиоприна
- •MaxдозаСгк
- •2 Раза
- •ДинамикакожныхвысыпанийубольныхИаПприлеченииазатиоприномвсочетаниисСгк
- •Осложнения,возникшиеустероидрезистентныхбольныхИаПприлеченииазатиоприномвсочетаниисСгк
- •ИзучениеэкспрессиигенаNf-kBустероидрезистентныхистероидчувствительныхбольныхИаПиеединамикинафонетерапииазатиоприном
- •ЭкспрессиягенаNFkB относительногеновэкспрессииGapdhв% 90
- •Интервалзначений
- •ЭкспрессиягенаNFkB относительногеновэкспрессии
- •Интервалзначений
- •ЭкспрессиягенаNf-kBотносительно экспрессиигеновGapdhв% 90
- •АнализклиническихданныхстероидрезистентныхбольныхИап приизмененииэкспрессиигенаNf-kBнафонетерапииазатиоприном
- •Определениефакторанекрозаопухолиα(tnf-α)убольныхИап
- •Клиническиепримеры больныхИап
- •Патологоанатомический диагноз.Комбинированноеосновноезаболевание.
- •Проведены обследования:
- •60 Преднизолона
- •Преднизолон Метипред
- •Длительностьприемапрепарата
- •Былпроведенонкопоиск:
- •Заключительный клинический диагноз:
- •Глава4.Обсуждение полученных результатов
- •Практическиерекомендации
- •Библиография
ЭкспрессиягенаNFkB относительногеновэкспрессииGapdhв% 90
9080 74,36
70
60
50
40
30
20
10
0
77,9
|
73,08 |
|
||
65,83 |
|
65,49 |
79,67
72,96
85,49
75,42
86,15
Ме:74,36,
Интервалзначений
:65,39-
86,17.
ПорядковыйномербольныхИАП
Рисунок89.СравнительнаяэкспрессиягенаNF-kBвгруппеСР(-)пациентов.
Изрисунка89очевидно,чтогруппаСР(-)пациентовхарактеризуетсяпоотносительномуколичествукДНКгенаNF-kBмедианой74,36%иинтерваломзначений[65,39%-86,17%].
Результаты,полученныеприанализеэкспрессиикДНКгенаNF-kBвгруппеСР(+)пациентовпредставленынарисунке90.Данныеполученыпорезультатам2-хизмерений(среднеезначение),кДНКгенаNFkBвычисляли
относительногеновGapdh(числокопий10⁶).
ЭкспрессиягенаNFkB относительногеновэкспрессии
Gapdhв%
10098
96,84
95,74
97,85
9695,96
98,61
,31
95,4496
93,39
94
92
90 88,8
88
86
84
82
80
,45
9292,6694,9
87,43
92,37
Ме:95,44,
Интервалзначений
:88,80-
98,61.
ПорядковыйномербольныхИАП
Рисунок90.ИсходныезначенияэкспрессиигенаNF-kBдоприемаазатиопринавгруппеСР(+)больных.
Изрисунка90очевидно,чтогруппаСР(+)пациентовхарактеризуетсяпоотносительномуколичествукДНКгенаNF-kBмедианой95,44%иинтерваломзначений[88,80%-98,61%].
ЭкспрессиягенаNF-kBотносительно
геновэкспрессииGapdhв%
100%90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
95%
74%
СР(+)больные СР(-)больные
Рисунок91.СравнительнаяхарактеристикамедианыкДНКгенаNF-kBуСР(+)иСР(-)больныхИАП.
Такимобразомизрисунка91следует,чтомедианапоотносительному
количествукДНКгенаNF-kBвгруппеСР(+)пациентоввыше,чемвгруппеСР(-)больных[95,44%и74,36% соответственно](p<0,05).
100
ЭкспрессиягенаNf-kBотносительно экспрессиигеновGapdhв% 90
9080
70
60
50
40
30
20
10
0
*
*
* ** * *
*
* *
**** **
****
****
доприемаАЗА 150мгАЗА 100мгАЗА 50 мгАЗАПорядковыйномербольныхИАП
*-статистическизначимыерезультаты
Рисунок92.ДинамикаэкспрессиикДНКNF-kBуСР(+)больныхдоинафонеприемаазатиоприна(p<0,01).
Такимобразом,доначалалечениявгруппеСР(+)пациентовотносительноечислокопийкДНКгенаNF-kBбыловыше,чемвгруппеСР(-)больных,иснижалосьвпроцесселеченияАЗАвкачествеадъювантнойтерапии, достигаяуровняпоказателяСР(-)больных.
АнализклиническихданныхстероидрезистентныхбольныхИап приизмененииэкспрессиигенаNf-kBнафонетерапииазатиоприном
ПрисравнительноманализеэкспрессиитранскрипционногофактораNF-kBдоивпроцессетерапииАЗАнайденостатистическизначимоеснижениеэкспрессии(р<0,01)увосьмибольных(больныеспорядковымномером1,2,4,6,9,11,12,14)(рисунок92).
Убольных№1,4,9наблюдалисьчастыеобострениядоназначенияАЗА,сыпьносилагенерализованныйхарактерспреимущественнойлокализациейнакожеволосистойчастиголовы,лица,грудииспины(клиническиепримеры2,6+фото5,6,7,8).
Фото5.КлиническиепроявленияубольнойСП(№1)долечения;множественныекорковыенаслоениянакожеспины.
Фото6.КлиническиепроявленияубольнойСП(№1)долечения;корковыенаслоениянакоженоса.
Фото7.КлиническиепроявленияубольнойСПчерез1,5годаотначалалечения(№1);ремиссиянафонесочетаннойтерапииСГКиАЗА.
Фото8.КлиническиепроявленияубольнойСПчерез1,5годаотначалалечения(№1);ремиссиянафонесочетаннойтерапииСГКиАЗА.
Больные№1(СП)и№4(ВП)демонстрировалиположительныйклиническийответввидерегрессавысыпанийна80%приназначенииАЗАсдлительнойполнойремиссией(клиническийпример2).НепереносимостьАЗАотмечаласьубольной№7,всвязисчемпрепаратбылотменен.ПридетальномизученииначальныйуровеньэкспрессиигенаNF-kBуданныхбольныхбылразличный,вдинамикепоказательзамедленноснижалсяубольного№9,которыйдемонстрировалдлительносуществующийочагнакожеволосистойчастиголовы(клиническийпример6).
Больные№2,11,12страдалиСП,приэтомнаблюдалосьторпидноетечениекожногопроцесса.НазначениеАЗАсдерживалопоявлениегенерализованныхвысыпанийиспособствовалорегрессустарых(клиническийпример1).ОднакополнойремиссииприназначенииАЗАненаблюдалось,продолжалипоявлятьсяединичныеэлементысыпиналице,верхнейчаституловища,подмолочнымижелезами.ПридетальномизученииначальныйуровеньэкспрессиигенаNF-kBуданныхбольныхтакжебылразличным,динамикапоказателя–положительной,чтонекоррелировалосклиническойдинамикой.
НазначениекомбинированнойтерапииСГКиАЗАбольной№6ВПснизкимначальнымуровнемэкспрессиигенаNF-kB,ногенерализованнымиобильнымивысыпаниямиспособствовалоснижениюидостижениюуровняэкспрессиигенаNF-kBСР(-)больных.Приэтомотмечаласьположительнаядинамикаввидерегрессавысыпанийна80-90%иремиссияболеедвухлет(клиническийпример4).
УбольногоСП№14приобостренияхвысыпаниячащелокализовалисьнакожелица,спиныигруди.ПриназначенииАЗАнаблюдалсяпрактическиполныйрегрессвысыпанийна90-100%,сполнойремиссией–1,5года.Приэтомуровень экспрессиигенаNF-kBдостигал показателейСР(-)больных.
Удвухбольных(№5,10)сповышеннойэкспрессиеймРНКβ-изоформыГР(клиническиепримеры3,7)идвухпациентов(№8,13)сосниженнойэкспрессиеймРНКα-изоформыГР(клиническиепримеры5,8)начальный
уровеньэкспрессиигенаNF-kBбылвысоким,отмечалосьзамедленноеснижениепоказателяпосравнениюсдругимипациентамичто,вероятно,способствуетрецидивамИАПнамалых дозахАЗАиСГК.
Наоснованиивышеизложенногоможнопредполагать,чтоэкспрессиягенаNF-kBу всехбольныхИАПповышена;вместестем,скоростьсниженияуровняэкспрессиигенаNF-kBиндивидуальнаиневсегдаотражаетклиническую динамикуИАП.