- •Розділ 1. Організація вірусологічних лабораторій.
- •Обладнання вірусологічних лабораторій
- •Правила роботи в учбових вірусологічних лабораторіях
- •Практична частина
- •Контрольні питання та контрольні завдання
- •Література
- •Тема 1: Використання лабораторних тварин у вірусологічних дослідженнях
- •Природні інфекційні хвороби деяких лабораторних тварин, збудники яких є патогенними для людини
- •Індикаторні тварини
- •Гнотобіотичні тварини
- •Показники мікроклімату в приміщеннях для лабораторних тварин
- •Густота посадки в клітках лабораторних тварин та птахів
- •Причини канібалізму та заходи його профілактики
- •Основні показники нормальної життєдіяльності різних видів тварин
- •Зв’язок тропізму вірусу зі способом ураження чутливого організму та видом патологічного матеріалу
- •Допустимі дози досліджуваного матеріалу, що вводиться лабораторним тваринам, мл
- •Методи зараження через травний тракт
- •Перкутанне (нашкірне) зараження
- •Кутанне (шкірне) зараження
- •Субкутанне (підшкірне) зараження
- •Інтракутанне (внутрішньошкірне) зараження
- •Інтравенозне (внутрішньовенне) та інтракардіальне (внутрішньосерцеве) зараження
- •Інтрамускулярне (внутрішньом’язеве) зараження
- •Інтраперітонеальне (внутрішньочеревинне) зараження
- •Субокципітальне (каркове) зараження
- •Інтрацеребральне (внутрішньомозкове) зараження
- •Зараження в периферичний нерв
- •Інтратестикулярне (внутрішньосім’яникове) зараження
- •Інтраокулярне зараження
- •Корнеальне зараження
- •Інтракорнеальне зараження
- •Кон’юнктивальне зараження
- •Забір крові
- •Антикоагулянти
- •Лабораторне заняття
- •Тема 2. Курячі ембріони та їх використання у вірусології
- •Теоретична частина
- •Практична частина
- •Будова курячого ембріону
- •Практична частина Лабораторне заняття
- •Тема 3. Клітинні культури у вірусології
- •Теоретична частина
- •Класифікація тваринних культур клітин
- •Одношарові культури клітин
- •Чутливість первинних культур клітин до вірусів людини
- •Характеристика деяких із відомих клітинних ліній
- •Переваги та недоліки використання постійних культур клітин
- •Чутливість постійних клітинних культур до вірусів
- •Суспензійні культури клітин
- •Зберігання культур клітин
- •Умови культивування клітин in vitro
- •Поживні середовища
- •Середовище 199 (Морган, Мортон, Паркер; 1950 р.)
- •Контамінація культур клітин
- •Взаємодія вірусів із клітинами
- •Методи виявлення та ідентифікації вірусів у клітинних культурах
- •Цитопатична дія
- •Внутрішньоклітинні включення
- •Титрування вірусів у одношарових культурах клітин
- •Практична частина Лабораторне заняття
- •Хід роботи
- •Контрольні завдання
- •Контрольні запитання
- •Література
- •Розділ 3. Віруси бактерій
- •Теоретична частина Загальна характеристика вірусів бактерій
- •Практична частина Методи титрування бактеріофагів
- •Титрування фагу за методом Аппельмана (рідке середовище)
- •Хід роботи:
- •Практична робота: Виділення фагів із лізогенних культур
- •Розділ 4. Дослідження вірусів рослин
- •Теоретична частина
- •Практична частина
- •Тема. Способи передачі вірусів рослин. Рослини-індикатори.
- •Практична частина Лабораторне заняття
- •Тема. 2. Виділення, очистка та концентрування вірусів рослин
- •Практична частина
- •Теоретична частина
- •Розділ 5. Використання електронної мікроскопії у вірусологічних дослідженнях.
- •Практична частина Хід роботи
- •Розділ. 6. Методи діагностики вірусних інфекцій та ідентифікації вірусів
- •Тема 1. Серологічні методи досліджень
- •Теоретична частина Реакція гемаглютинації
- •Імунологічні методи дослідження
- •Імунодифузійні тести.
- •Радіоімунологічний аналіз (ріа)
- •Імунофлуоресцентний аналіз (іф)
- •Імуноферментний аналіз
- •Практична частина Практична робота №1
- •Хід роботи
- •Практична робота №2
- •Хід роботи
- •Список літератури
- •Тема 2. Застосування полімеразної ланцюгової реакції у вірусологчних дослідженнях
- •Обладнання для плр
- •Компоненти реакції.
- •Параметри температурних циклів
- •Аналіз плр-ампліфікованої днк
- •Real-time pcr (прл у реальному часі) та її застосування у вірусологічних дослідженнях.
- •Словник використаних термінів
- •Верхній агар
- •Нижній агар
- •Цитратний буфер, 0,1м, рН 3,0 –6,2
- •Ацетатний буфер,0,1м , рН 3.6-5,6 Розчин а
- •0,1М оцтова кислота
- •С) Солі та інші речовини, г/л
Показники мікроклімату в приміщеннях для лабораторних тварин
Вид тварини |
Температура (°С) |
Максимально допустима концентрація в повітрі |
Кратність повітрообміну (об’єм за годину) |
Освітлення |
|||
Межі коливання |
Середнє значення |
аміаку, мг/л |
вуглекислоти, % до об’єму |
витяжка |
приток |
||
Миші |
18-26 |
22 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
Напівморок |
Пацюки |
20-24 |
22 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
- “ - |
Хом’яки |
18-26 |
22 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
- “ - |
Мурчаки |
16-23 |
20 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
Денне світло |
Кролики |
14-18 |
16 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
- “ - |
Собаки |
18-22 |
20 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
- “ - |
Кішки |
18-22 |
20 |
0,01 |
0,15 |
8 |
10 |
- “ - |
Мавпи |
20-30 |
25 |
0,01 |
0,15 |
10 |
15 |
- “ - |
У вірусологічних дослідженнях найчастіше використовують скляні банки та цільнометалеві клітки завдяки зручності миття та дезінфекції. Незалежно від конструкції кожна клітка обов’язково повинна мати піддон, що виймається, де збираються залишки їжі, калу та сечі. В якості підстилки використовують матеріали, що абсорбують вологу та пристосовуються тваринами для будування гнізд (пісок, полова, сіно, солома, торф’яна крихта, стружка та тирса різного розміру, та ін.).
Дрібних лабораторних тварин та птахів розміщують в клітках на стелажах в 3-4 яруси (перший на відстані 30-70 см від підлоги), дотримуючись рекомендованої густоти посадки, яку обраховують з розрахунку 1 г маси тіла тварини на 1 см3 для клітки (табл.2.3.).
Мурчаків розміщують в звичайних сітчастих металевих клітках по 2-3 тварини. Кроликів бажано утримувати по одному в клітці в прохолодному неопалюваному приміщенні.
Таблиця 2.3.
Густота посадки в клітках лабораторних тварин та птахів
Вид тварин |
Мінімальна площа дна клітки на одну тварину, см2 |
Максимально допустима кількість тварин в клітці |
Число тварин на 1 м2 площі підлоги приміщення |
|
Дорослі |
Молодняк |
|||
Миші |
40 |
15 |
65 |
240 |
Пацюки |
150 |
10 |
20 |
100 |
Хом’яки |
100 |
5 |
30-40 |
30-40 |
Мурчаки |
300 |
5 |
5-18 |
5-18 |
Кролики |
2000 |
1 |
3-4 |
3-4 |
Кішок, які часто хворіють лише від одного перебування в обмеженому просторі приміщення клітки, краще тримати в окремих кімнатах, або вольєрах з настінними лавами-лежанками на різній висоті. Собак розміщують по одній в окремих кабінах-боксах, даючи можливість вільно рухатися. Невеликих мавп, як макака-резус, також розміщують по одній в клітках розміром 1,51,51,5м. Великих мавп розміщують в кімнатах-вольєрах.
Важливо зберігати чистоту приміщень, кліток та посуду. Не можна переставляти годівниці, поїлки. Двічі на рік треба проводити повну дезінфекцію приміщення. У випадку епізоотії захворілих тварин ізолюють від здорових і віварій переводять на карантин. Трупи померлих тварин в секційній кімнаті розтинають, вивчаючи патологічний матеріал, а потім разом з підстилкою спалюють в кремаційній печі.
Поняття “карантин” було введено з 14 століття для боротьби з чумою, коли на віддалений острів висаджували на 40 днів екіпажі кораблів, а вже потім доставляли на острів Сицилію (від італ. “каранта” – “сорок”).
Експериментальних тварин розводять у спеціальних розплідниках. Лише невелика їх кількість знаходиться у віваріях при вірусологічних лабораторіях. Ті тварини, що заново надходять у віварій, спочатку витримуються в карантинному відділенні. Під час карантину у тварин можуть проявитися різні захворювання: чи латентні, чи ті, що були в інкубаційному періоді, чи ті, що тварина здобула під час транспортування в результаті переохолодження.
Згідно “Ветеринарному законодавству України”, для тварин встановлюються наступні строки перебування в карантині: для собак – 30 днів, білих мишей та пацюків – 10 днів, всіх інших тварин – 21 день. Для мавп та тварин, які проживають в надто відмінних умовах, строки карантину та адаптації збільшуються до 2-3 місяців. В ці проміжки часу укладається тривалість інкубаційного періоду тих захворювань, на які частіше хворіють тварини.
Тварини повинні забезпечуватися регулярним годуванням та питною водою. Годування повинно бути повноцінним за хімічним складом та достатнім за кількістю. Корм тварин повинен містити всі речовини, необхідні для нормального перебігу процесів життєдіяльності, тобто білки, жири, вуглеводи, мінеральні солі та вітаміни. Для різних видів тварин існують певні кормові норми, раціони та режим годування. При нестачі води порушуються фізіологічні та біохімічні процеси в організмі, затримується ріст, знижується резистентність до інфекцій, виникають патологічні зміни.
Правильна організація повноцінного годування в поєднанні з оптимальними умовами утримання забезпечує добрий загальний стан, ріст, розвиток та розмноження тварин. Вона підвищує стійкість тварин до захворювань, зміцнює їхню імунну систему і, як наслідок, грає значну роль у високоякісному проведенні вірусологічних досліджень.
Нерідко у лабораторних тварин (мишей, пацюків, кролів, тощо) спостерігається канібалізм. Причини його можуть бути різноманітними (табл.2.4.).
Таблиця 2.4.