- •Розділ 1. Організація вірусологічних лабораторій.
- •Обладнання вірусологічних лабораторій
- •Правила роботи в учбових вірусологічних лабораторіях
- •Практична частина
- •Контрольні питання та контрольні завдання
- •Література
- •Тема 1: Використання лабораторних тварин у вірусологічних дослідженнях
- •Природні інфекційні хвороби деяких лабораторних тварин, збудники яких є патогенними для людини
- •Індикаторні тварини
- •Гнотобіотичні тварини
- •Показники мікроклімату в приміщеннях для лабораторних тварин
- •Густота посадки в клітках лабораторних тварин та птахів
- •Причини канібалізму та заходи його профілактики
- •Основні показники нормальної життєдіяльності різних видів тварин
- •Зв’язок тропізму вірусу зі способом ураження чутливого організму та видом патологічного матеріалу
- •Допустимі дози досліджуваного матеріалу, що вводиться лабораторним тваринам, мл
- •Методи зараження через травний тракт
- •Перкутанне (нашкірне) зараження
- •Кутанне (шкірне) зараження
- •Субкутанне (підшкірне) зараження
- •Інтракутанне (внутрішньошкірне) зараження
- •Інтравенозне (внутрішньовенне) та інтракардіальне (внутрішньосерцеве) зараження
- •Інтрамускулярне (внутрішньом’язеве) зараження
- •Інтраперітонеальне (внутрішньочеревинне) зараження
- •Субокципітальне (каркове) зараження
- •Інтрацеребральне (внутрішньомозкове) зараження
- •Зараження в периферичний нерв
- •Інтратестикулярне (внутрішньосім’яникове) зараження
- •Інтраокулярне зараження
- •Корнеальне зараження
- •Інтракорнеальне зараження
- •Кон’юнктивальне зараження
- •Забір крові
- •Антикоагулянти
- •Лабораторне заняття
- •Тема 2. Курячі ембріони та їх використання у вірусології
- •Теоретична частина
- •Практична частина
- •Будова курячого ембріону
- •Практична частина Лабораторне заняття
- •Тема 3. Клітинні культури у вірусології
- •Теоретична частина
- •Класифікація тваринних культур клітин
- •Одношарові культури клітин
- •Чутливість первинних культур клітин до вірусів людини
- •Характеристика деяких із відомих клітинних ліній
- •Переваги та недоліки використання постійних культур клітин
- •Чутливість постійних клітинних культур до вірусів
- •Суспензійні культури клітин
- •Зберігання культур клітин
- •Умови культивування клітин in vitro
- •Поживні середовища
- •Середовище 199 (Морган, Мортон, Паркер; 1950 р.)
- •Контамінація культур клітин
- •Взаємодія вірусів із клітинами
- •Методи виявлення та ідентифікації вірусів у клітинних культурах
- •Цитопатична дія
- •Внутрішньоклітинні включення
- •Титрування вірусів у одношарових культурах клітин
- •Практична частина Лабораторне заняття
- •Хід роботи
- •Контрольні завдання
- •Контрольні запитання
- •Література
- •Розділ 3. Віруси бактерій
- •Теоретична частина Загальна характеристика вірусів бактерій
- •Практична частина Методи титрування бактеріофагів
- •Титрування фагу за методом Аппельмана (рідке середовище)
- •Хід роботи:
- •Практична робота: Виділення фагів із лізогенних культур
- •Розділ 4. Дослідження вірусів рослин
- •Теоретична частина
- •Практична частина
- •Тема. Способи передачі вірусів рослин. Рослини-індикатори.
- •Практична частина Лабораторне заняття
- •Тема. 2. Виділення, очистка та концентрування вірусів рослин
- •Практична частина
- •Теоретична частина
- •Розділ 5. Використання електронної мікроскопії у вірусологічних дослідженнях.
- •Практична частина Хід роботи
- •Розділ. 6. Методи діагностики вірусних інфекцій та ідентифікації вірусів
- •Тема 1. Серологічні методи досліджень
- •Теоретична частина Реакція гемаглютинації
- •Імунологічні методи дослідження
- •Імунодифузійні тести.
- •Радіоімунологічний аналіз (ріа)
- •Імунофлуоресцентний аналіз (іф)
- •Імуноферментний аналіз
- •Практична частина Практична робота №1
- •Хід роботи
- •Практична робота №2
- •Хід роботи
- •Список літератури
- •Тема 2. Застосування полімеразної ланцюгової реакції у вірусологчних дослідженнях
- •Обладнання для плр
- •Компоненти реакції.
- •Параметри температурних циклів
- •Аналіз плр-ампліфікованої днк
- •Real-time pcr (прл у реальному часі) та її застосування у вірусологічних дослідженнях.
- •Словник використаних термінів
- •Верхній агар
- •Нижній агар
- •Цитратний буфер, 0,1м, рН 3,0 –6,2
- •Ацетатний буфер,0,1м , рН 3.6-5,6 Розчин а
- •0,1М оцтова кислота
- •С) Солі та інші речовини, г/л
Характеристика деяких із відомих клітинних ліній
Позначення |
Походження |
Ознаки |
||||
Вид |
Тканина |
Морфологія |
Ріст у суспензії |
Ефективність висіву, % |
Плоїдність |
|
ЗТЗ |
Миша, n=20 |
Ендотелій |
фібробласти |
- |
50 |
Анеуплоїдні |
L |
-”- |
Сполучна тканина |
« |
+ |
90 |
« |
СНО/КХ |
Китайський хом’ячок, n=11 |
Яєчник |
Епітелій |
+ |
95 |
Псевдодиплоїдні |
ВНК 21 |
Золотистий хом’ячок |
Нирка |
Фібробласти |
+ |
20 |
Диплоїдні |
BSC |
Макака-резус. n=21 |
-”- |
Епітелій |
- |
Незначна (< 20) |
-”- |
МРS |
Миша, n=20 |
Мієлома |
Лімфоїдна тканина |
+ |
0 |
Анеуплоїдні |
RPH |
Жаба, n=13 |
Яйцеклітини |
Епітелій |
- |
0 |
Гаплоїдні |
HeLa |
Людина, n=13 |
Пухлина шийки матки |
Епітелій |
+ |
95 |
Анеуплоїдні |
Приклади постійних культур клітин: SV-28 – постійна культура нирки новонародженого хом’яка, трансформована вірусом SV-40; MCF–7 -карцинома молочної залози людини; HeLa – карцинома шийки матки людини (рис.2.22.b.); Hep–2 – карцинома гортані людини; КВ – карцинома ротової порожнини людини; RH – нирка ембріону людини; Vero – нирка зеленої мавпи; L - мишачі фібробласти (рис. 2.22.a.); C-1300 – нейрабластома миші; СНЕВ - нирка ембірона свині та ін.
Таблиця 2.12
Переваги та недоліки використання постійних культур клітин
Переваги постійних КК |
Недоліки постійних КК |
Здатність до необмеженого розмноження |
Схильність до злоякісного перетворення (малігнізації) |
Простота отримання→економія праці та матеріальних затрат |
Швидке зниження чутливості до вірусів, у порівнянні з первинними КК |
Можливість попередньої перевірки на присутність латентної вірусної інфекції та сторонньої мікрофлори |
|
Забезпечення стандартних умов для розмноження вірусів, в порівнянні з первинними КК (що являють собою популяцію змішаних типів клітин) |
|
Широкий спектр чутливості до вірусів, в порівнянні з відповідними первинними КК |
a b
Рис.2.22. Постійні культури клітин:
a – мишачі фібробласти;
b - HeLa
Таблиця 2.13
Чутливість постійних клітинних культур до вірусів
Назва культури клітин |
Походження культури клітин |
Віруси |
HeLa |
Карцинома шийки матки жінки |
Аденовіруси (1-33), респіраторно-синцитіальний вірус, поліовірус (1-3), ЕСНО (1-9, 11-27, 29,33), Коксакі А (2,3, 7, 18, 21) |
Hep-2 |
Карцинома гортані людини |
-„- |
KB |
Карцинома ротової порожнини людини |
Аденовіруси, поліовіруси (1), арбовіруси |
RH |
Нирка ембріона людини |
Аденовіруси (1-33), респіраторно-синцитіальний вірус, віруси парагрипу |
L132 |
Легеня ембріона людини |
Аденовіруси, респіраторно-синцитіальний вірус, коронавіруси, поліовіруси (1-3), ЕСНО |
Vero |
Нирка зеленої мавпи |
Коксакі В (1-6), поліовіруси (1-3), арбовіруси, реовіруси, віруси везикулярного стоматиту (ВВС), вісповакцини, простого герпесу (1-2) |
L929 |
Фібробласти миші |
Арбовіруси, ВВС |
BHK-21 |
Нирка сірійського хом’яка |
Вірус сказу, простого герпесу, аденовіруси (25), реовіруси (3), ВВС |
СНЕВ |
Нирка ембріона свині |
Арбовіруси (група кліщового енцефаліту) |
MDCK |
Нирка собаки |
Віруси грипу типу а і В, ВВС, вісповакцини, Коксакі В (5), реовіруси (2,3), аденовіруси (4,5) |