Практична частина Лабораторне заняття

Завдання: розглянути препарати культури клітин тварин in vitro, ознайомитись з їх морфологічними особливостями та класифікацією. Навчитися визначати тип ЦПД вірусів у культурі клітин.

Матеріальне забезпечення: світловий мікроскоп, забарвлені мікропрепарати первинних, постійних та диплоїдний клітинних культур, забарвлені мікропрепарати клітинних культур з різними типами ЦПД та включень, таблиці, слайди.

Хід роботи

1. Продивитися під світловим мікроскопом неінфіковані вірусом культури клітин, які відносять до первинних, диплоїдних та постійних. Визначити їх морфологію, тип клітин, вказати ступінь щільності популяції клітинного моношару.

2. Дослідити фіксовані забарвлені препарати інфікованих вірусами культур клітин для виявлення ознак цитопатичної дії, описати їх.

3. Знайти внутрішньоклітинні включення при інфекціях, що викликані різними вірусами.

4. Замалювати препарати здорових та вірусінфікованих клітинних культур.

5. Порівняти морфологію неінфікованих та інфікованих вірусами клітинних культур.

Контрольні завдання

1. Поясніть різницю між поняттями “багатоядерна клітина”, “симпласт” та “синцитій”.

2. Визначте титр вірусу методом кольорової реакції, якщо при її постановці шоста пробірка ще має жовте забарвлення. Розведення вірусу в першій пробірці 10^-1, а в кожній наступній - зменшується в 10 раз.

3. Необхідно визначити титр вірусу в суспензії. Для достовірного виявлення концентрації вірусу в дослід узяли декілька розведень вірусної суспензії: 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000. По 0,2 мл розведеної суспензії внесли в рівні об’єми культур клітин у матрасах. Кожне розведення вірусу досліджували на 3 матрасах. Через 5 днів інкубації отримали наступні результати: в матрасах, в які вносили вірусну суспензію в концентрації 1:10, неможливо було провести розрахунок бляшок, оскільки відбувалося їх злиття; в матрасах з концентрацією вірусної суспензії 1:100 спостерігали утворення 135, 128 та 140 бляшок; в матрасах з концентрацією вірусної суспензії 1:1000 – 35, 40, 37 бляшок; в матрасах із концентрацією вірусної суспензії 1:10000 – 5, 7, 8 бляшок.

Контрольні запитання

1. Для чого використовують клітинні культури у вірусології?

2. Назвіть типи клітинних культур. Охарактеризуйте кожен із них.

3. Які розчини і поживні середовища використовують для культивування клітин?

4. Який компонент додають у сольові розчини як індикатор зміни їх рН?

5. Які основні методи виявлення та індикації вірусів у культурі клітин ви знаєте?

6. Які причини виникнення ЦПД?

7. Класифікація ЦПД.

8. Що таке внутрішньоклітинні включення? Яка їх природа?

9. Які способи визначення титру вірусу ви знаєте?

Література

Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков.-М.: Мир., 1983. -263 с., ил.

Букринская А.Г. Вирусология.-М.: Медицина, 1986.-336 с., ил.

Голубев Д.Б., Сомина А.А., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии.-Л.: Медицина., 1976.- 224 с.

Культура животных клеток. Методы: пер.с англ../ Под ред. Р. Фрешни.- М.: Мир., 1989.-333 с., ил.

Новые методы культуры животных тканей/ Под ред. Оленова Ю.М.- М.: Мир, 1976.- 255 с., ил.

Сергеев В.А., Собко Ю.А. Культуры клеток в ветеринарии и биотехнологии.-К.: Урожай., 1990.-152 с.

Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии.- 2-е изд., перераб. и доп. –М.: Колос, 2000.- 272 с, ил.